何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺NGF mRNA、EGF mRNA表达的影响

葛志华 李俊玫 李隆庆 周晓慧 (承德医学院附属医院，河北 承德 067000)

本文采用D-半乳糖诱发衰老大鼠模型，用原位杂交法检测下颌下腺NGF mRNA、EGF mRNA表达的改变，从基因转录水平探讨衰老对下颌下腺分泌功能的影响及何首乌饮抗下颌下腺衰老的作用机制，为下颌下腺衰老相关疾病的防治奠定理论基础和提供实验数据。

1 资料与方法

1.1 材料与仪器 VT1000S振荡切片机(德国LEICA公司);Olympus光学显微镜(日本);实验大鼠购自河北省实验动物中心，合格证编号:605106。何首乌饮方剂由炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓组成(本院贾春华教授提供)购自承德富尔康药业有限公司。

1.2 实验动物的选择及分组 选用8周龄清洁级SD雌性大鼠90只，体重180～220 g，随机分为预防性和治疗性两大实验部分，每部分5组，每组9只。

1.3 模型的建立及各组动物的处理方法 预防性实验部分:何首乌饮(HSWY)预防高(Ph)、中(Pm)、低 (Pl)剂量组大鼠腹腔注射D-半乳糖的同时每日分别灌胃HSWY(3.872，1.936，0.968 g/100 g，水煎浓缩成 0.6 ml/100 g)，每天一次，连续60 d。正常组(N)大鼠正常喂60 d。模型组(M)大鼠每日腹腔注射D-半乳糖(300 mg/kg)，连续60 d。治疗性实验部分;何首乌饮治疗高(Th)、中(Tm)、低(Tl)剂量组大鼠腹腔注射D-半乳糖，1次/d，连续 60 d后分别灌胃 HSWY(剂量同上)，1次/d，连续60 d。阴性对照组(NC)大鼠每日按0.5 ml/100 g腹腔注射生理盐水，连续60 d后每日灌胃生理盐水0.6 ml/100 g，连续60 d。自然恢复组(S-R)大鼠腹腔注射D-半乳糖，1次/d，连续60 d后正常喂养60 d。

1.4 原位杂交标本的取材及固定 大鼠经10%水合氯醛(0.3 ml/100 mg)腹腔注射麻醉后，开胸，经左心室插管入主动脉，生理盐水冲净血液后4%多聚甲醛灌注、固定，取双侧下颌下腺，4%多聚甲醛后固定过夜。……