体外冲击波诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

崔 博 郑学清 舒 畅 于铁成 徐 鹏 (吉林大学第一医院碎石中心，吉林 长春 300)

长期以来，体外冲击波(ESW)一直被用于治疗泌尿系统结石，在骨科主要用来治疗骨折不愈合、运动系统慢性劳损性疾病，取得了良好效果，具有创伤小、风险低、费用少、周期短等优点〔1，2〕，但其机制尚不完全清楚。Wang 等〔3〕发现低能冲击波可促使骨髓间充质干细胞(MSCs)细胞膜的电势发生超极化，激活细胞内网状激活系统，诱导转化生长因子(TGF)－β1的产生、最终诱导骨小结形成，提示ESW诱导MSCs向成骨细胞分化可能是其治疗骨折不愈合等疾病的作用机制之一。本实验观察ESW对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖活性的影响，为ESW和hMSCs的临床应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源和主要试剂 骨髓来源于正常成人献髓者，体外液电冲击波碎石机MODEL KDE－2001，标准胎牛血清(Gibco公司)，RNeasy mini column 试剂盒(QIAGEN 公司)，RT－PCR 试剂盒、Trizol试剂、DNA Marker(Takara公司)，X－光衍射仪(日本电机株式会社)。

1.2 hMSCs培养 以健康自愿者为对象，局麻下用含肝素的注射器从髂后上棘抽取5～10 ml骨髓。将骨髓标本移入离心管中，加入等体积的无血清的 L－DMEM，1000 r/min，5 min，洗涤多余的脂肪细胞。将Percoll液和 PBS配制成密度为1.073 g/cm3的细胞分离液;15 ml离心管内加入与血清等体积的分离液后，将收集的骨髓缓慢加在分离液上部，2500 r/min离心30 min，用吸管吸取单个核细胞层，分散在含10%胎牛血清的L－DMEM培养液中，接种于塑料6孔培养板，在37℃含5%CO2的饱和湿度空气中培养;接种72 h换液，以后每3～4 d换液，7～10 d首次传代;当细胞长满培养孔80%左右时，用0.25%胰蛋白酶将细胞消化，接种于培养瓶内，每3～4 d换液1次，7～10 d传代。……