吸烟对2型糖尿病大鼠肾脏中期因子表达的影响

王晓蕾 时艺珊 柏 松 (沈阳医学院沈洲医院内分泌科，辽宁 沈阳 110002)

2007年中国糖尿病患者人数已达3980万，预计2025年将达到5930万〔1〕。对糖尿病易患因素及其发病机制的研究已经引起学者们的极大关注。吸烟是导致人群多种疾病发生和死亡的重要影响因素。研究表明，吸烟与糖尿病(尤其2型糖尿病)及其并发症的发病有明确关系〔2〕。本研究通过观察吸烟的2型糖尿病大鼠肾脏组织中期因子(midkine，MK)的表达情况，分析吸烟对糖尿病肾病发病的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组 取60只Wistar大鼠(购自中国医科大学)，8周龄，雄性，清洁级。体重130～200 g。去除体重差异较大的大鼠，随机分配为三组。①正常对照组20只。②2型糖尿病非吸烟组20只。③2型糖尿病吸烟组20只。

1.1.2 主要设备及试剂 链脲佐菌素(streptoztocin，STZ，美国Sigma公司);颗粒饲料(购自中国医科大学);高糖高脂饲料(自配);香烟为市售X牌香烟，尼古丁含量1 mg/支，焦油含量18 mg/支。RNA提取试剂盒、cDNA合成试剂盒及RT－PCR试剂盒(美国Ambion公司)。按GenBank合成引物。日立7170全自动生化仪(日本日立公司);PCR仪(德国Biometra公司);Chemi Imager 5500凝胶图像系统(美国Alpha Innotech公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型建立 ①确定胰岛素抵抗动物模型:三组大鼠均每笼3～4只，饲养7 w，室温21℃ ～26℃，湿度 50% ～60%，12 h光照周期，动物室内每天清扫消毒。正常对照组予普通饲料喂养，2型糖尿病吸烟组及2型糖尿病非吸烟组给予高糖高脂饲料喂养。饮水为纯净水。三组7 w时测空腹血糖及胰岛素，确定胰岛素抵抗动物模型。②小剂量STZ静脉注射诱导2型糖尿病模型〔3〕:2型糖尿病吸烟组及2型糖尿病非吸烟组大鼠尾静脉注射STZ 15 mg/kg(以pH4.5的0.1 mmol/L枸橼酸钠缓冲液配成0.3%浓度)，对照组仅注射枸橼酸钠缓冲液。……