依那普利拉通过调控PKC/TGF－β1通路抗鼠心室成纤维细胞增殖

于 静 孙红霞 (北华大学化学学院，吉林 吉林 3203)

心肌纤维化(MF)表现为以心室成纤维细胞增殖和间质胶原过度沉积及异常分布为特征的心脏重构。血管紧张素(Ang)Ⅱ通过心室成纤维细胞(CFb)上的AT1受体，导致CFb增殖和胶原合成增加，引起心肌纤维化〔1〕。目前的研究结果显示，依那普利拉(Ena)是依那普利的活性成分，可用于治疗高血压、心肌梗死、心力衰竭、心室重构等疾病，但其抑制mF的分子机制，尤其信号传导通路的研究很少〔2〕。本实验在细胞水平上观察Ena对AngⅡ诱导CFb增殖、细胞周期、Ⅲ型胶原纤维(collagen)Ⅲ含量、蛋白酶C(PKC)和转化生长因子(TGF)－β1蛋白表达及PKC抑制剂白屈菜赤碱(Chele)对上述各指标影响，揭示其抗MF作用的信号通路。

1 材料与方法

1.1 试剂、仪器及细胞 Ena(江苏常州制药厂200616);白屈菜赤碱，胰蛋白酶:宝泰克生物试剂;AngⅡ，PKC，TGF－β1(小鼠抗大鼠单克隆抗体)、四氮唑盐(MTT)均为sigma公司产品;IMDM培养基购自HyClone Utah公司;胎牛血清(FCs):杭州四季青;Heraeus型CO2培养箱;SUNRISE TECAN FO39300型自动酶联检测仪(澳大利亚);日本Olympus倒置显微镜;超净工作台;S－P免疫组化试剂盒:福州迈新;出生1～3 d的Wistar大鼠心室，胰酶消化，收集细胞，置于含100 ml/L FCs的IMDM培养液中，在 50 ml/L CO2、37℃、饱和湿度条件下培养60～90 min。采用差速贴壁法，分离CFb，加入含100 ml/L FCs的IMDM继续培养。经倒置显微镜、透射电镜、免疫组化纤维黏连蛋白染色阳性和平滑肌肌动蛋白染色阴性鉴定为所需的CFb，纯度达98%，生长近融合时按1∶3传代，实验采用2～4代细胞。

1.2 实验分组 分为五组，Control:含有IMDM的培养液;AngⅡ组:培养液中加入终浓度为10－7mol/L的AngⅡ;Chele+AngⅡ组:培养液中同时加入终浓度为 10－7mol/L AngⅡ和10－6mol/L Chele;Chele+AngⅡ+Ena组:培养液中同时加……