RG－14260与雷帕霉素联合给药对两株子宫内膜癌细胞的作用

邓守恒 喻雄杰 曹凤军 柯贤柱 陈 萍 石小燕

(湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心，湖北 十堰 442000)

子宫内膜癌是中老年妇女常见的恶性肿瘤之一，近年来，发病有年轻化趋势，但其发病机制仍不十分清楚。已知子宫内膜癌的发生、发展与一些信号通路的活性改变密切相关，其中主要包括表皮生长因子受体 (EGFR)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)两条信号通路。当前，抑制相关信号通路已成为肿瘤靶向治疗的热点，故本研究拟以人10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白类似物 (PTEN)表达不同的两株子宫内膜癌细胞株 (PTEN缺失的 Ishikawa细胞和 PTEN表达完整的HEC－1A细胞)为研究对象，采用特异性信号通路抑制剂对两株细胞中EGFR及mTOR两条通路进行干预，探讨不同PTEN状态下两条信号通路在子宫内膜癌发生发展中的可能作用，为进一步阐明发病机制，合理选择抗肿瘤药物提供新的依据。

1 材料与方法

1.1 药品试剂与仪器 表皮生长因子(EGF)、噻唑喃(MTT)、碘化丙啶(PI)为Sigma产品;EGFR抑制剂RG－14620(RG)、mTOR抑制剂雷帕霉素(RA)购自美国Biomol公司;兔抗人pAKT及β－actin单抗及山羊抗兔的二抗购于北京中杉金桥生物技术有限公司;ECL发光液购于Pierce公司;其他试剂均为进口分装分析纯;Mod 550型全自动酶标仪(美国Bio－Rad公司);Epics Elite ESP型流式细胞仪(美国Coulter公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组 两株子宫内膜癌细胞株(Ishikawa和HEC－1A)由本院临床医学研究所提供，培养于含10%小牛血清的DMEM培养基内，于37℃、饱和湿度，5%CO2条件下培养。两株细胞分别经EGF预处理2 h，并分别给予10 μmol/L RG、10 μmol/L RA、10 μmol/L+10 μmol/L RA，另设空白对照细胞(未给予任何信号通路抑制剂)。……