广东省猪大肠杆菌优势血清型O107外膜蛋白的提取

王文豪，张丹琳，苏丹萍，贺东生

（华南农业大学兽医学院 广东省人畜共患病重点实验室，广东 广州 510640)

猪大肠杆菌是条件性致病菌，可终年使猪群发病，且各年龄段的猪均可发病，尤其对仔猪的危害异常严重。多年来，对于大肠杆菌病的防控主要是通过接种灭活苗的方法进行的。这种方法固然起到一定的效果，但由于大肠杆菌血清型众多，不同菌株的交叉免疫保护力低下。因此，灭活苗不能在很大的范围内推广应用。而大肠杆菌的外膜蛋白具有良好的免疫原性，且对不同菌株有交叉保护能力，是一种良好的保护性抗原[1-2]。外膜蛋白疫苗将会有较好的发展前景。本实验从广东省猪大肠杆菌优势血清型O107中，选出一株有致病性的菌株，并对该菌株的外膜蛋白进行抽提，以期为外膜蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 菌株

肠致病性大肠杆菌O107由华南农业大学兽医学院传染病教研室分离鉴定得到。

1.2 主要化学试剂

2%的十二烷基肌氨酸,纯度≥95%,分析纯,过硫酸铵,sigma 公司产品。10 mmol/L的HEPES(N-2-羟乙基哌嗪- N′-2-乙磺酸),pH7.4,纯度≥99%，分析纯,丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺,Amresco 公司产品。Tris、溴芬兰、甘油、β-巯基乙醇等其他试剂均为国产试剂，低分子质量蛋白Marker购买于Bio-Rad公司。

1.3 主要仪器

超速离心机，型号为BECKMANL8-M ,贝克曼产品。高速冷冻离心机( 6K15)，购于Sigma公司。超声波细胞粉碎仪(FS300)，购于上海生析超声仪器有限公司。气浴恒温振荡器(摇床)，SHZ-82型，江苏金坛中大仪器厂。

1.4 方法

1.4.1 OMP 的提取

将菌株接种于普通营养琼脂平板上,37 ℃培养18～24 h；……