青蒿素衍生物对非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响

赵 昉 广州中医药大学热带医学研究所 广州 510405

郑绍琴 广州中医药大学硕士研究生

青蒿素是从中药菊科植物黄花蒿（Artemisia annua L）的叶中提取而来，其衍生物包括：青蒿素（artemisinin）、青蒿琥酯（artesunate，Art）、双氢青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）等。青蒿素的药理作用广泛，包括抗疟原虫、抗肿瘤、免疫抑制、抗病毒、抗孕等多种活性药理作用[1-4]。本研究通过对青蒿素、青蒿琥酯、双氢青蒿素对肺癌A549增殖的影响，观察不同青蒿素衍生物的抗肿瘤作用。

1 实验材料

1.1 细 胞 非小细胞肺癌A549，引自美国ATCC，由本室冻存传代保管。

1.2 药 物 青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯，由广东新南方青蒿科技有限公司提供。阳性药物5-氟尿嘧啶（5-FU）注射液，上海旭东海普药业有限公司，批号101103，规格0.25g/10 mL。1.3 试剂仪器 低糖DMEM、HEPES均购自美国GIBCO公司；小牛血清购自广州畜牧场，批号20100618；L-谷氨酰铵和MTT均购自Sigma公司；其他相关产品为国产试剂。美国宝特ELX800型全自动酶标仪、全自动CO2孵箱(上海力申科学仪器有限公司，型号：HF90），倒置显微镜（日本 Olympus，型号CK40）、海尔生物安全柜（青岛海尔特种电器有限公司，型号：HR40-ⅡA2）。

2 实验方法

初步检测A549的细胞倍增时间和青蒿琥酯、双氢青蒿素、青蒿素在A549的半数毒性浓度。结合初步实验结果，选取TC10作为后续实验浓度，观察各青蒿素衍生物对A549肺癌细胞增殖的影响。

2.1 细胞接种 常规复苏细胞后，待细胞生长至一定数量后，用0.25%胰酶消化1～5 min，终止消化，并用含10%血清的DMEM培养基重悬细胞。计数后用完全培养基调整细胞浓度为5.0×105/mL，按0.1 mL/孔接种于96孔细胞板上，37℃、5%CO2条件培养。

2.2 A549细胞生长曲线的绘制 按2.1方法接种细胞，于接种后每24 h做一次MTT染色。……