重组人体干细胞因子的表达、复性、纯化及其对脐带血干细胞体外扩增作用研究

范 洁,丁欣欣,蒋永平,2

(1.中国医学科学院北京协和医学院苏州方舟生物医药研发中心,江苏苏州,215126;2.苏州方舟基因药业有限公司,江苏苏州,215126)

在需要造血干细胞的相关临床治疗中,骨髓移植作为造血干细胞(HSC)的来源之一,是目前应用比较广泛的治疗手段[1]。胎儿脐血(UCB)中含有大量的造血干细胞,另外,新生儿的造血干细胞其增殖潜力更强,生命周期及端粒更长[2]。单份UCB中HSC绝对数量较少,无法满足临床需求。因此要促进UCB的应用首先要解决UCB体外扩增的问题[3]。CD34蛋白多表达于造血干/祖细胞表面,CD34+细胞具有集落形成能力和强大的增殖能力。因此,需要对CD34+细胞群体加以体外扩增培养,以获得大量的具有分化潜能的HSC[4]。适量干细胞因子(SCF)与其他细胞因子联用可对HSC进行有效的体外扩增[5]。目前国内SCF原核表达多采用热诱导表达或表达分泌型蛋白,具有一系列缺陷,本实验采用IPTG诱导表达获取包涵体,可有效提高SCF表达量,同时减少因温度不易控制而造成的表达量不理想等问题,为重组人体干细胞因子(rhSCF)的临床研究及HSC的体外扩增应用打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

表达rhSCF的E.coli BL21工程菌由Genscript公司制备;新生儿脐带血标本来自于苏州九龙医院及苏州大学附属第一医院产科,所采脐血均征得患者同意。

1.2 方法

1.2.1 rhSCF蛋白诱导表达及纯化:将成功转化了表达质粒pET43.1a-SCF的E.coli BL21接种于100 μ g/mL氨苄西林的 2×YT培养液,摇菌、离心沉淀、超声裂菌、再离心、去离子水洗后获得包涵体。将包涵体搅拌并稀释后透析。……