骨折预处理对兔骨髓来源间充质干细胞的影响

席冬梅，曾 勇

（三峡大学仁和医院骨科，湖北 宜昌443001）

骨髓来源间充质干细胞（bone marrow derived mesenchymal stem cells，MSC）在特定的生理和病理情况下，能迁移到特定的组织器官参与组织的修复重建[1-2]，且其作为骨组织工程的种子细胞已得到广泛应用[3]。目前的研究多集中于后期处理对MSC功能及分化的影响，而前期对所取得骨髓标本进行预处理的研究比较少见。因此，本研究对比了骨折预处理对兔MSC的影响，旨在为其更好地应用于骨组织工程及其功能研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

胎牛血清、DMEM高糖培养基购于美国Gibco公司，磷酸盐缓冲液（PBS）购于武汉博士德生物工程有限公司。流式细胞仪购自美国BD公司（型号：FACSCalibur）。

1.2 动物分组及骨折模型制作

12 周龄兔 10 只，雌雄不限，体质量（2 512±48）g，购于三峡大学医学院动物实验中心。按随机数字表法分为骨折预处理组和对照组，每组5只。将骨折预处理组兔麻醉后沿股外侧肌间隙钝性分离进入到达股骨干，在胫骨干中1/3段用线锯锯断成横形骨折，以直径3mm克氏针作逆行髓内固定，骨折固定牢固后，用生理盐水冲洗伤口，碘伏消毒，关闭伤口。对照组未进行任何处理。

1.3 MSC的培养

骨折预处理组骨折模型制作好7 d后，从另一侧股骨处无菌抽取骨髓1～2 mL，用 5 mL PBS混匀后，离心机（1 000 r·min-1）离心 10 min。 将沉淀的MSC细胞重悬于5 mL 10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养液中，2×106个接种于塑料培养瓶中。对照组从股骨抽取骨髓培养，方法同骨折预处理组。

1.4 MSC的周期测定

待细胞已铺瓶底＞80%后，采用酶消化法常规消化细胞，离心，弃上清，PBS冲洗2次，加入4℃预冷的70%乙醇3 mL固定过夜。……