鹿茸中次黄嘌呤的超声辅助提取法研究

梁芳慧 靳丹虹 董丽丹

鹿茸为鹿科动物梅花鹿(Cervus nippon Temminch)或马鹿(Cervus elaphus Linnaeus)的雄鹿密生茸毛的未骨化的幼角［1］。鹿茸具有增强免疫功能、抗氧化、抗疲劳和抗衰老等药理作用［2］。在抗氧化及抗衰老作用中，鹿茸中的次黄嘌呤、对羟基苯甲醛和磷脂会抑制与神经系统老化有关的单胺氧化酶(MAO)的活性［3］。目前，测定次黄嘌呤含量的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)和高效毛细管电泳法［4，5］。本文将超声辅助提取与反相高效液相色谱结合测定经焙干处理后鹿茸样品中的次黄嘌呤的含量，并采用正交设计法对提取条件进行了优化。本方法简便、准确、可靠，适用于焙干鹿茸样品中次黄嘌呤的定量分析。

1 实验部分

1.1 仪器与试药 高效液相色谱仪(安捷伦1200型)，KQ5200超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)，JB/T5374-1991电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。

次黄嘌呤对照品(北京奥博星生物技术责任有限公司，含量＞98%，批号:20040815);超纯水，甲醇(色谱纯)，乙醇(分析纯)，冰醋酸(分析纯)均购于天津大学科威公司;鹿茸经切片，焙干粉碎后过100目筛(鹿茸来源，长春市双阳鹿场)。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件及系统适应性 色谱柱:AgilentTC C18(250 mm×416 mm，5 μm);流动相:含0.07%冰醋酸的3%甲醇溶液;流速:1.0 ml/min;检测波长:254 nm;柱温:20℃;进样量20 μl。按次黄嘌呤峰计算，理论塔板数不低于3000。在实验条件下次黄嘌呤的保留时间为9.59 min，与相邻未知峰的分离度＞1.5。

1.2.2 样品前处理 准确称取焙干鹿茸样品1.0000 g，置于250 ml具塞锥形瓶中，加50%乙醇40 ml，放入60℃水温的超声波中提取40 min后，以12000 r/min转速离心3 min，取上清液于100 ml容量瓶中，用50%乙醇定容，再用0.45 μm滤膜过滤，滤液待用。……