脂多糖对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响

纪少军，万立，李凤玉，贾国洪，闫永宏，石军

(解放军第二五一医院急诊科，河北张家口 075000)

创面愈合是一个复杂的生物学过程，包括炎症反 应、细胞增殖、创面收缩和胶原代谢等基本环节。成纤维细胞作为创面修复的主要细胞之一［1］，其增殖和胶原合成的变化直接影响创面修复的结局。我们既往研究证实，细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可以刺激正常人皮肤成纤维细胞增殖［2］。为了探讨LPS在创面修复中的作用，我们研究LPS对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响。

1 材料与方法

1.1 标本来源

标本来源于我科收治的整形患者20例，其中男11例，女9例，年龄2～56岁，平均(20±15)岁。

1.2 主要试剂及仪器

Dulbecco改良的培养基;LPS E．coli 055:B5;胎牛血清;L-脯氨酸;3H-脯氨酸;酶联免疫标记仪。

1.3 成纤维细胞培养

原代培养采用组织块法［3］。

1.4 LPS作用浓度

用4%基础培养基稀释LPS，参照既往研究报告确定 LPS 的实验浓度［2，4］，作用浓度为 0.005、0.01、0.05、0.1、0.5 和 1.0 μg·ml-1。

1.5 成纤维细胞胶原合成的检测

取对数生长期的成纤维细胞，以含10%FCS的DMEM培养基制成1×104个·ml-1的细胞悬液，接种于96孔平底培养板中，每孔200 μl，在相同培养条件下，细胞贴壁后，各组正常成纤维细胞更换预先配置的LPS工作液，每个LPS浓度设4个平行孔。以加LPS工作液时间为准，第2天将24 h标记期的3H-脯氨酸掺入(掺入量0.5 μCi·孔-1)稳态、融合的单层培养成纤维细胞中［5］，第3天采用胃蛋白酶消化法检测培养液中胶原量，实验结果以dpm·(1 000细胞)-1表示。

1.6 统计学处理

采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

LPS对正常人皮肤成纤维细胞胶原合成的影响:LPS刺激浓度在0.005～0.5 μg·ml-1时，促进正常皮肤成纤维细胞的胶原合成。……