中草药提取物体外抗菌活性测定方法的初步探讨

俞晓丽 王 君 闻 平

(江苏大学附属人民医院检验科，江苏省镇江市电力路8号，212002)

中药药敏试验方法有纸片琼脂扩散法、试管稀释法、平板稀释法、打洞法、挖沟法等，目前我国尚无统一完整的中药药敏试验方法，这给从事中药新药鉴定工作者带来困惑。我们对几种药敏实验方法进行了探讨，并力图寻找一个像西药纸片琼脂扩散法——Kirby-Bauer法一样的一个统一且比较完善、理想的方法。

1 材料与方法

1.1 材料 1)菌种:临床分离大肠杆菌、金黄色葡萄球菌各一株。2)中药:大蒜素获自黑龙江宝岛制药有限公司，黄芩素获自美国SIGMA公司，胡桃楸提取物［1］(本实验室自制)。3)培养基:试验中所用MH液体培养基和MH琼脂培养基均为杭州天和微生物试剂有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 管碟法 将试验菌株接种于营养琼脂平板，37℃培养18h后，用生理盐水洗下，用比浊法配成105CFU/mL菌液，用棉签涂抹于营养琼脂平板，放上特制钢杯，钢杯内径0.5cm，高0.8cm，盛入不同浓度上述各种中药原液0.157mL，37℃培养24h，测量抑菌圈大小。

1.2.2 标准稀释法［2］在试管中用MH液体培养基将各种中药原液稀释为 1/2、1/4、1/8，然后加入105CFU/mL菌液0.1mL，同时设不加中药的阳性对照管，37℃培养18h观察，以MH液体培养基混浊，无沉淀管判为阴性。

1.2.3 平板稀释法 取无菌9cm平皿9个，每个加无菌生理盐水2mL。根据培养皿底面上注明的药物稀释度，在第一个平皿原药液2mL，混匀，取倍比稀释药液2mL至第二个平皿，以此类推至第8个平皿。第9个平皿不加药做阴性对照。在上述的每个平皿中加入试管中的60℃培养基18mL，倒入培养基马上摇匀，摇匀为顺/逆时针7次，摇匀后，平放，冷凝。……