GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化

王青元，朱 靖，周 颖，许乾乾，朱圆圆，凌 斌

（安徽医科大学附属省立医院 妇产科分子实验室，安徽 合肥 230001）

GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化

王青元，朱 靖，周 颖，许乾乾，朱圆圆，凌 斌＊

（安徽医科大学附属省立医院 妇产科分子实验室，安徽 合肥 230001）

目的 构建GRIM-19及其截断体原核表达载体，在大肠杆菌中诱导表达并纯化融合蛋白。方法用RTPCR法从HeLa细胞中扩增出带BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19及其截断体基因片段，将GRIM-19及其截断体基因片段克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上，在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白，用Glutathione Sepharose 4B纯化，纯化后蛋白经 Western-blot鉴定。结果pGEX-4T-3-GRIM-19及其截断体原核表达载体构建正确，并在大肠杆菌中成功诱导表达，IPTG诱导以浓度0.5mM，时间2h为宜，且通过Glutathione Sepharose 4B成功纯化到融合蛋白。结论成功构建GRIM-19及其截断体原核表达载体，诱导表达并纯化GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白。

GRIM-19；诱导表达；纯化

（ChinJLabDiagn，2012，16：0191）

GRIM-19（gene associated with retinoid-interferon mortality-19，GRIM-19），是 GRIMs家族的重要成员［1］，是2000年 Angell等［2］发现的由IFN 联合RA诱导表达的一种新的细胞凋亡调节因子，定位于19p13.2，该区的多种基因为前列腺癌的抑制基因。参与细胞增殖和凋亡的调控过程，其表达降低或位点突变可以导致细胞的异常增殖和恶性转化，GRIM-19在多种正常组织中表达，参与IFN／RA诱导的肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤的发生［3］。本实验我们利用基因克隆技术构建了GRIM-19及其截断体原核表达载体，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导pGEX-4T-3载体质粒启动子，成功诱导了GST-GRIM-19及其截断体的融合蛋白的表达，为今后研究GRIM-19的分子生物学功能奠定了基础。……