猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5a/ORF5 重叠区的分离

刘闰夏, 蔺 涛,2, 田德斌,韦祖樟, 孙利厂,2, 陆嘉琦, 袁世山, 童光志

(1.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241；2.南京农业大学动物医学院，南京 210095)

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病 毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的猪的一种高度接触性传染病，主要引起母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸系统疾病，给养猪业造成了严重危害和巨大的经济损失[1,2]。PRRSV与马动脉炎病毒、小鼠乳酸脱氢酶病毒和猴出血热病毒同属于动脉炎病毒科，动脉炎病毒属[3-5]。根据血清型和遗传特性的差异，PRRSV分为两个基因型，即欧洲（I）型和美洲（II）型，两型同源率约为60%[6-9]。

目前已知PRRSV基因组有10个首尾重叠的开放阅读框（open reading frame，ORF），其中ORF1a和ORF1b编码病毒的非结构蛋白，ORF2a、ORF2b、ORF3、ORF4和ORF5编码囊膜蛋白，ORF6和ORF7分别编码膜基质蛋白M和核衣壳蛋白N，ORF5a是最新发现的普遍存在于动脉炎病毒中的ORF，它编码5a蛋白[10,11]。ORF5a大部分序列与ORF5重叠甚至完全包埋在ORF5中，它们可能由同一个亚基因组sg mRNA5转录，但使用不同的读码框[12]。目前人们对5a蛋白了解甚少，深入研究5a蛋白的结构与功能对于全面认识PRRSV的结构蛋白及其相互作用具有重要意义。但是ORF5a绝大部分序列与ORF5重叠，我们只有在保证不改变ORF5氨基酸编码序列的前提下，通过突变ORF5a的个别核苷酸来改变5a蛋白的氨基酸序列进而研究5a蛋白的功能，这使得研究内容非常有限。

本研究利用PRRSV反向遗传系统[13]，将I型PRRSV的ORF2～ORF5a替换进II型PRRSV的相应区域，目的是探讨I型5a蛋白及其编码基因能否在II型PRRSV中发挥作用，同时期望将I型PRRSV的ORF5a从ORF5中独立出来，从而为进一下研究5a蛋白的结构与功能奠定基础。……