固相萃取离子色谱法测定反义寡核苷酸药物杂质*

马金平，仲婕，鲁丹丹，张金钟，施明珠，高婵，朱德领

(1.杭州天龙药业有限公司，310021;2.军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850)

反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides)是一种新型抗肿瘤和抗病毒的靶向治疗药物，由固相合成而得成品。由于在合成和工艺中使用了醋酸(acetic acid，MCAA)、二氯乙酸(dichloroacetic acid，DCAA)等溶剂，纯化工艺中使用了氯化钠，因此有必要建立寡核苷酸原料药中杂质MCAA、DCAA和氯离子(Cl－)的质控方法。目前通用的有机残留测定方法来自于ICH和《中华人民共和国药典》2010年版气相色谱法(GC)[1]，由于MCAA极性大，沸点较高，需要对样品进行衍生化处理，定量结果变异较大，《中华人民共和国药典》2010年版又收载了MCAA残留的液相色谱方法[1]，笔者经实验后发现峰形不好、检测限高，长期用于生产化药物控制对色谱柱有一定损耗;对含卤素的残留溶剂DCAA，GC-FID法灵敏度低，GC-ECD则会受氧元素影响。MCAA和DCAA都是能够离子化的化合物，可在水中离解，离子色谱(IC)是较好的选择，早期国内有文献报道用梯度淋洗IC法分析DCAA和MCAA[2-3]，笔者采用IC等度分析，同时测定寡核苷酸原料药中的杂质MCAA、DCAA和Cl－的含量，方法简单，快捷可靠，线性范围宽，所需试剂少，检测灵敏度高，可为建立ASON质量标准提供技术参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器美国Dionex公司ICS-900型离子色谱仪，抑制型电导检测器，Chromeleon色谱工作站。分析柱:Ionpac AS23(4 mm×250 mm)，保护柱:Ionpac AG23(4 mm×50 mm)。美国Agilent 6890N气相色谱仪，色谱柱:HP-5(30 m×0.25 mm，0.25 μm)。C18固相萃取小柱:WAT020805，Waters Sep-pak C183cc/500 mg。

1.2 试药碳酸氢钠(NaHCO3，Fluka分司生产，批号:0001446842，色谱纯)，无水碳酸钠(Na2CO3，天津市化学试剂研究所生产，优级纯，含量≥99%)，二氯乙酸(Sigma-Alorich公司生产，批号:STBB5017，纯度≥99%)，氯离子标……