长期胆汁反流对大鼠胃黏膜的影响

王学伟 曹勤 唐剑敏

（上海中医药大学附属普陀医院消化内科，＊病理科，上海 200062）

长期胆汁反流对胃和食管黏膜的影响尚不明确。研究［1］发现胆汁反流至胃，甚至食管，十分常见。Dixon等［2］通过病理研究发现，胆汁反流可能与胃窦黏膜肠化生有关。近年来研究［3］发现，胆汁反流不但与反流性食管炎有关，而且可能是Barrett食管的重要病因，还可能与食管腺癌的发生有关［4］。因此，明确长期胆汁反流对胃和食管黏膜的病理影响，具有重要的临床意义。本研究建立模拟人体生理性胆汁反流途径的大鼠模型，观察长期胆汁反流对大鼠胃黏膜的病理影响，通过免疫组化方法研究长期胆汁反流对胃泌素表达的影响，并探讨其在胆汁反流中的作用。

1 资料与方法

1.1 动物和抗体 Sprague－Dawley大鼠，清洁级，雄性，8周龄，体质量250～300 g，购自中国科学院上海实验动物中心。羊抗大鼠胃泌素多克隆IgG抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗羊IgG抗体购自北京中山公司。

1.2 动物模型 大鼠预适应1周，术前禁食24 h，只给予5%葡萄糖液，术前6 h禁葡萄糖液。麻醉采用10%水合氯醛0.3 mL／100 g腹腔注射。上腹正中切口4 cm，于十二指肠胆总管开口下0.5 cm处横断十二指肠、缝合断端，于前胃与腺胃交界2 mm处前胃大弯侧作1 cm切口，距Treitz韧带4 cm远侧空肠系膜对侧作1 cm切口，行胃－空肠吻口。术后24 h禁食，给予5%葡萄糖液，24 h后少量进食饲料，3 d后恢复正常饮食。

1.3 组织病理 模型建立1年后，13只大鼠经10%水合氯醛0.3 mL／100 g腹腔注射麻醉，断头法处死，大鼠胃经10%甲醛固定72 h，石蜡包埋，切片厚度4μm，HE染色。

1.4 免疫组化 切片65℃烘烤1 h，脱蜡、水化，自来水洗10 min，蒸馏水洗2次，蒸馏水浸泡5 min；……