人结直肠癌耐药细胞株HT-29/CPT-11的构建及其生物学特性探讨

冯婉婷，车晓玲，李进，宗明珠，史玉叶，曹维克，何敬东

(1.南京医科大学，江苏南京 210029;2.南京医科大学附属淮安第一人民医院 肿瘤内科，江苏淮安 223300)

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是消化道最常见恶性肿瘤之一，占所有恶性肿瘤的10% ～15%［1］。伊立替康(CPT-11)作为拓扑异构酶抑制剂家族成员之一，可抑制DNA单链断裂后修复，干扰DNA复制和转录，导致肿瘤细胞死亡［2］，现已广泛应用于转移性CRC的治疗［3］，无论是用于一线治疗，还是在氟尿嘧啶治疗失败后的二线治疗，CPT-11均显示了其抗肿瘤的活性。然而化疗药物引起的耐药是制约其疗效的重要因素之一，因此，不断提高患者化疗敏感性是临床化疗亟需解决的重要课题。目前，有关预测CPT-11耐药性的相关分子标志物的研究相对较少，主要集中在药物代谢过程中参与的酶、转运蛋白以及作用靶点蛋白的基因。人结肠癌耐药细胞株的建立可为研究肿瘤耐药机制、逆转CRC耐药提供实验基础。因此，本研究将采用逐步提高培养基中CPT-11浓度的方法，间歇诱导CRC细胞耐药，并对亲本细胞与耐药细胞进行比较，初步探讨其生物学特性及其耐药机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人源性结直肠癌细胞株HT-29购自中国科学院上海生命科学研究所。

1.1.2 试剂与载体 CPT-11(Sigma公司)，细胞周期检测试剂盒(Beckman公司)，RNA提取试剂Trizol(Invitrogen公司)，逆转录及扩增试剂盒(Biouniquer公司)，CCK-8细胞增殖检测试剂盒(日本同仁化学研究所)，1640培养基(美国Hyclone公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)，PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及耐药细胞的建立 将人结直肠癌细胞株HT-29置于含有10%胎牛血清、100 U·ml－1青霉素和100 μg·ml－1链霉素的 1640 培养基，置 37 ℃、5%CO2孵箱中培养。……