卵黄高磷蛋白的纯化及其对RAW264.7生长形态的影响

吕瑜峰，王亮，张佳慧，帖航，孙佩佩，吴子健

（天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津市食品生物技术重点实验室，天津 300134）

卵黄高磷蛋白（phosvitin，PVS）是蛋黄中主要的磷蛋白，约占蛋黄蛋白质的 7%[1]，有 α－PVS（37、42 、45 Ku）和 β－PVS（45 Ku）两种，其中 β－PVS 含量较 α－PVS多[2]。PVS具有独特的物化特性，其分子中磷的含量约10%，是已知蛋白质中磷酸化程度最高的，主要原因在于其分子中约50%的氨基酸残基是丝氨酸残基，且90%丝氨酸残基被磷酸化[3]。正是由于其高度磷酸化性质，使其具有很强的乳化性、抗氧化性、杀菌性以及金属离子螯合力（蛋黄中所含的约95%的铁离子与其结合）[4]。

目前PVS的分离纯化大致可分为两步，先是从蛋黄中分离出PVS粗品，然后采用层析技术进一步纯化。然而，现有的方法常使用非食品级的有机溶剂来实现PVS与脂质的分离，会改变PVS结构，且不适合在食品工业上的应用[1－7]。Castellani等采用 Mg2+来沉淀 PVS，虽然未用有机溶剂，但提取过程过于繁琐且耗时[8]。近来，Ko等[9]利用乙醇和钠盐建立了一种可以大规模提取PVS的方法，其回收率可达到97%，但所得产品纯度不高。本文旨在采用阴离子交换层析提高PVS产品的纯度并进一步研究其对RAW264.7细胞生长的影响。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂

鸡蛋：市售；1－氨基－2萘酚－4－磺酸：沃凯；Coomassie R250：sigma；SDS－PAGE标准品：Fermentas；Q SepharoseTMFastFlow强阴离子交换树脂：GEHealthcare；小鼠巨噬细胞RAW264.7:中科院上海细胞库；胎牛血清:GBICO；DMEM培养基:Hyclone；其它试剂为国产分析纯。

1.2 主要仪器与设备

UDK－159全自动凯氏定氮仪：意大利VELP公司；WFZ800－D3B紫外可见光分光光度计：北京瑞利；CXG－1电脑恒温层析柜：上海沪西；PowerPacTMUniversal电泳仪电源：美国BIO－RAD；……