山仙颗粒对H22移植瘤小鼠TGF－α和端粒酶表达影响的实验研究＊

方 瑜 李仁廷 陈光伟 陕西中医学院（咸阳 712046）

原发性肝癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，严重威胁人民群众的生命及健康。我国是原发性肝癌的高发地区，据最新估计，2008年全球新增肝癌患者约74.8万，其中我国40.2万（54%）［1，2］。其起病隐匿、病程较短、来势凶险、侵袭性强、死亡率较高（20.4／10万），已成为一个极其严重的国际卫生问题［3］。本实验通过建立H22腹水型瘤株移植瘤小鼠模型，研究山仙颗粒对肝癌小鼠的癌细胞生长的影响和可能的作用机制，通过对TGF－α和端粒酶的表达来分析，从而为山仙颗粒在临床上的应用提供实验依据。

1 材 料 1.1 肝癌移植型瘤株 H22腹水型肝癌瘤株，（由第四军医大学实验动物中心提供），昆明小鼠腹腔内传代7d。合格证号：SCXK（军2011－005）。

1.2 实验动物 选用健康雌性KM小鼠85只，体重18～22g，月龄1～1.5月。（由西安交通大学医学院实验动物中心提供），动物合格证号：SCXK（陕2007－001）。

1.3 实验用药 山仙颗粒（SXG）：（陕中附院制剂研究中心，批号：20110527，组方：西洋参30g，延胡索24g，莪术、仙鹤草、山楂各15g，龟版、鳖甲、猪苓各12g，），SXG按小鼠5g／kg（相当于临床用量）用生理盐水配置成0.5g／mL混悬液。阳性对照药替加氟（50mg／片，生产批号：20110305）研磨，按成人用量1000mg／d（成人体重60kg）计算，加入蒸馏水0.3mL，则浓度为1000mg÷60kg×9.01×0.02kg÷0.2mL＝15mg／mL。

1.4 试剂 兔抗小鼠TGF－α单克隆抗体（一抗），产品编号：bs－0066R，0.1mL；TRT／TERT 端粒酶反转录酶抗体，产品编号：bs－0233R，0.2mL；羊抗兔多克隆抗体（二抗），DAB显色剂，型号：C－0003；均购于北京博奥森生物科技有限公司；SP免疫组化试剂盒，型号：SP－9002；购于北京中杉金桥生物技术有限公司。4%多聚甲醛、0.1mmol／L PBS缓冲液由陕西中医学院中心实验配置。

2 方 法 2.1 动物……