短暂脑缺血对大鼠海马脑区锥体神经元外向整流氯通道功能的影响

李建国，刘乃红，陈建鸣

海马CA1区的锥体神经元对于缺血损伤特别敏感，并且在短暂前脑缺血后呈现迟发性神经元凋亡，而CA3和齿状回神经细胞不受此影响。目前对这种选择性细胞死亡的机制仍不清楚［1］。研究表明，细胞凋亡参与了脑缺血后神经元的死亡过程［2］，而且钾通道和氯通道等离子通道参与细胞的凋亡过程［3，4］。

目前，除了三类已知基因表达的氯离子通道，如配体门控氯通道（甘氨酸受体和GABA受体）、ClC氯通道（ClC1～ClC7，ClC－K1和ClC－K2）和囊性纤维变性调节因子氯通道（CFTR），细胞膜上还分布着一种功能表达的氯通道，即外向整流氯离子通道（outwardly rectifying chloride channels）。这是一种中等电导大小，具有外向整流特性的氯通道。虽然其分子结构仍然不清楚，但是大量的研究发现，外向整流氯离子通道参与了细胞的凋亡性死亡过程［4］，细胞死亡的程度能够被氯通道阻断剂所减缓［5］。因此，认为外向整流氯离子通道可能参与了海马CA1区锥体神经元在缺血后出现的迟发性死亡过程。为探讨这种可能性，本实验运用全细胞膜片钳技术观察了短暂前脑缺血后，大鼠海马CA1和CA3区锥体神经元外向整流氯离子通道活性的变化情况。

1 材料与方法

1.1 脑片的制备与神经元的急性分离 按以往报道的方法急性分离神经元［6］。实验采用成年雄性 Wistar大鼠（180g～250 g）。麻醉后（水合氯醛40mg／100g）快速断头并取出大脑，在振动切片机上切成厚度400μm的脑片。把切好的脑片放置于通以95%O2和5%CO2混合气的EBSS液中孵育1h～4h，然后分离出海马脑区并放入用100%O2饱和的HBSS液……