碧血胶囊对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用1）

刘新军，苏式兵

心肌缺血是冠心病最基本的病理生理过程，严重威胁着人类的身体健康，成为心血管病的主要致病方式。碧血胶囊是在活血化瘀验方的基础上，通过实验筛选而确定由水蛭、三七、绞股蓝等多种中药组成的复方制剂，有活血化瘀，健脾祛痰之功效。本研究用腹腔注射异丙肾上腺素（ISO）的方法制备大鼠心肌缺血模型，观察碧血胶囊对血清丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的活性，心电图及心肌组织病理变化的影响，探讨碧血胶囊对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 MDA、SOD、LDH、CK试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所；美托洛尔（倍他乐克）片购于阿斯利康制药有限公司（批号：0906078）；通心络胶囊购于石家庄以岭药业股份有限公司（批号：090112）；盐酸异丙肾上腺素注射液购自上海禾丰制药有限公司（批号：20080702）；碧血胶囊（由水蛭、三七、绞股蓝等组成），每粒胶囊0.43g，由上海埃克生物制品有限公司提供（批号：080228）。

1.2 动物 SD大鼠70只，体重（160±20）g，雄性，上海西普尔必凯实验动物有限公司提供。

1.3 主要仪器 心电图机：上海医疗电子仪器公司ECG－6511；酶标仪：BIOTEK实验仪器厂。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及用药情况 SD大鼠70只，随机分为7组，分别为正常对照组、模型对照组、西药阳性对照组（倍他乐克10 mg／kg）、中药阳性对照组（通心络胶囊500mg／kg）、碧血胶囊高剂量组（968mg／kg）、碧血胶囊中剂量组（484mg／kg）、碧血胶囊低剂量组（242mg／kg），每组10只。将药物溶于2mL的去离子水中，灌胃给药。正常对照组和模型对照组给同体积去离子水，各组均每天给药1次，连续14d。

1.4.2 ISO诱导的心肌缺血损伤模型的制备 按照Rona等[1]的方法，除正常对照组外，其余各灌胃组均于第12天、第13天、第14天灌胃给药30min后腹腔注射ISO 5mg／kg，制备大鼠心肌缺血损伤模型。

1.4.3 心电图的检测 于第1次注射ISO前及最后1次注射ISO 30min后，予20% 乌拉坦麻醉大鼠，将心电图机电极分别插入四肢皮下，记录标准肢体Ⅱ导联心电图（纸速50mm／s，定标1mV＝20mm，以PQ为基线测量），与造模前心电图进行自身比较，按照潘志伟等[2]方法观察T波振幅变化。△T（心电图T波变化值）＝注射ISO 30min后心电图T波高度（μV）－注射ISO前心电图T波高度（μV）。

1.4.4 检测血清指标 严格按照试剂盒说明书在BIOTEK酶标仪上测定SOD、MAD、LDH、CK的活性。

1.4.5 病理组织学观察及判断标准 大鼠取血后，开胸取出心脏，置于冰冷的生理盐水冲洗，除去血液，滤纸吸干，称重，用10%甲醛固定，石蜡包埋后切片（切片厚度4mm），常规HE染色，在光学显微镜下观察心肌病理组织的变化情况。根据Rona等[1]和Teerlink等[3]的评分标准将心肌病理分为6级，分别对应 0分、1分 、2分 、3分、4分、5分。

2 结 果

2.1 一般情况的观察 正常组大鼠精神状态良好，饮食正常，活动状况好，有活力，叫声响亮。模型组大鼠饮食较少，精神状态差，不爱活动，叫声低微。各用药组大鼠较模型组精神状态有所改善，食量基本正常，活动情况较模型组改善。

2.2 复方碧血胶囊对大鼠心重与体重之比的影响 模型组与正常组比较，比值明显增高（P＜0.01）。与模型组比较，通心络胶囊组与碧血胶囊高剂量组心重与体重比值显著降低（P＜0.05），倍他乐克组与模型组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 复方碧血胶囊对大鼠心重与体重之比的影响（±s）

表1 复方碧血胶囊对大鼠心重与体重之比的影响（±s）

组别 剂量（mg／kg） 心重／体重（mg／g）正常组 －3.31±0.29模型组 － 3.99±0.231）通心络胶囊组 500 3.75±0.212）倍他乐克组 10 3.91±0.19碧血胶囊低剂量组 242 3.97±0.18碧血胶囊中剂量组 484 3.89±0.29碧血胶囊高剂量组 968 3.76±0.242）与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05

2.3 复方碧血胶囊对大鼠SOD、MDA、LDH、CK活性的影响与正常组比较，模型组大鼠SOD活性明显降低（P＜0.01）。与模型组相比，倍他乐克组、通心络胶囊组及碧血胶囊中、高剂量组SOD活性增高，CK、LDH活性降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与模型组相比，通心络胶囊组与碧血胶囊中、高剂量组MDA、CK活性降低，差异有统计意义（P＜0.05）。详见表2。

表2 复方碧血胶囊对大鼠SOD、MDA、LDH、CK活性的影响（±s）

表2 复方碧血胶囊对大鼠SOD、MDA、LDH、CK活性的影响（±s）

组别 剂量（mg／kg） SOD（U／mL） MDA（mmol／L） CK（U／mL） LDH（U／L）正常组 － 173.56±4.60 2.31±0.40 0.52±0.36 3 923.46±606.43模型组 － 164.16±3.551） 3.13±0.941） 1.24±0.791） 5 801.15±1 606.891）通心络胶囊组 500 173.59±4.512） 2.55±0.852） 0.58±0.412） 4 508.64±1 561.162）倍他乐克组 10 174.01±3.972） 2.71±0.63 0.65±0.612） 4 407.02±1 046.89碧血胶囊低剂量组 242 170.13±2.68 2.88±0.61 0.78±0.38 4 562.22±1 792.29碧血胶囊中剂量组 484 174.07±4.092） 2.82±0.41 0.60±0.412） 4 530.90±404.082）碧血胶囊高剂量组 968 174.91±4.972） 2.51±0.632） 0.48±0.432） 4 824.44±1 258.15与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05

2.4 对心电图T波振幅的影响 正常组大鼠T波均未见改变，基本维持在注射前水平。模型组大鼠注射后T波高耸，各用药组T波振幅均有不同程度的降低，以通心络胶囊组和碧血胶囊高剂量组最为明显。以注射ISO前后各组的T波振幅差值作比较进行统计分析，与正常组比较，模型组T波振幅变化差异有统计学意义（P＜0.01），除碧血胶囊低剂量组外，各组与模型组比较，T波变化差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。详见表3。

表3 复方碧血胶囊对大鼠血清心电图T波的影响（±s）

表3 复方碧血胶囊对大鼠血清心电图T波的影响（±s）

组别 剂量（mg／kg） △T段振幅（μV）正常组 －0.44±0.33模型组 － 1.74±1.021）通心络胶囊组 500 0.69±0.643）倍他乐克组 10 1.11±0.542）碧血胶囊低剂量组 242 1.17±0.53碧血胶囊中剂量组 484 1.02±0.472）碧血胶囊高剂量组 968 0.69±0.533）与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01

2.5 心肌组织的病理组织学观察 在正常组，心肌组织结构清楚，细胞形态正常。在模型组，病理改变显著，组织结构紊乱，大片肌细胞崩解，消失，片状坏死，大量单核细胞浸润，细胞损害严重。在各用药组，组织结构病变程度好于模型组，以倍他乐克组和碧血胶囊高剂量组最为明显，仅有少量灶形坏死和单核细胞浸润，部分肌细胞变性、胞浆丰富、深染。以判断标准中的六种分级方法对病理切片进行评分，结果显示，与正常组比较造模组分值增高（P＜0.01），倍他乐克组、碧血胶囊高剂量组与模型组比较分值降低（P＜0.05）。详见表4。

表4 复方碧血胶囊对大鼠心肌组织病理变化的影响（±s）

表4 复方碧血胶囊对大鼠心肌组织病理变化的影响（±s）

组别 剂量（mg／kg） HE染色评分（分）正常组 －0模型组 － 4.00±1.411）通心络胶囊组 500 2.89±0.78倍他乐克组 10 2.60±1.072）碧血胶囊低剂量组 242 3.67±0.87碧血胶囊中剂量组 484 3.10±1.53碧血胶囊高剂量组 968 2.80±1.322）与正常组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05

3 讨 论

本研究采用Rona等[1]的方法改进的采用异丙肾上腺素腹腔注射的方法造模，异丙肾上腺素作用于β受体，使心率加快，心肌收缩力增加，心输出量和耗氧量增加，且由于舒张期过短而妨碍冠状动脉血流灌注，从而引起心肌缺血。表现为SOD活力下降，MDA含量增加，CK、LDH活性增高[4]。SOD活性和MDA含量可以反映体内氧自由基代谢水平，同时也可以作为判断心功能及心肌受损程度的指标[5]。心肌缺血损伤可导致心肌细胞通透性增高，使一些可溶性的心肌酶类大量释放到血液中，从而使血清心肌酶的含量显著升高，故常通过检测血清心肌酶含量以判断心肌受损情况[6]。心电图是检测心血管疾病的重要手段之一。心电图多表现为T波高耸，ST－T段下降，QRS波群增宽、振幅降低[7]。由于大鼠心电图缺乏ST－T段的特点，常将T波变化值作为评价心肌缺血损伤程度的重要指标[8]。病理切片表现为心肌增生肥大，炎症细胞浸润，胶原组织增生，甚至组织坏死[9]。

本研究结果显示，与正常组比较，模型组大鼠血清LDH、CK、MDA活性增高，SOD活性降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。T波高耸，心肌组织病理可见大片细胞死亡，大量炎细胞浸润，说明心肌缺血模型成立。

心肌缺血在中医中称之为胸痹，其主要病机为心气不足，心血瘀阻，痰浊凝滞，脉管阻塞，不通则痛，故基本病机为心脉不通，治则多以活血化瘀药物为主。碧血胶囊是由三七、水蛭、绞股蓝等组成。绞股蓝能提高缺血再灌注心肌SOD活性，降低MDA水平[10]。三七的主要成分三七总皂甙能够显著减轻异丙肾上腺素所致的大鼠心肌缺血病理损伤程度[11]。还可降低血清肌酸激酶同工酶（CK－MB），心肌超微结构损伤明显减轻；TUNEL心肌凋亡阳性细胞数减少[12]。水蛭素可显著降低缺血心肌内白细胞聚集，降低梗死面积，减轻心肌再灌注损伤[13]。然而，由三七、水蛭、绞股蓝等组成的中药复方对心肌缺血缺氧的影响，尚未见有研究报道。

作为阳性对照药物的倍他乐克是β受体阻滞剂，可以抑制异丙肾上腺素的作用[14]，也是临床常用药物。通心络胶囊可以抑制缺血再灌注的心肌细胞凋亡[15]，还可以影响垂体后叶素所诱导的急性心肌缺血的心电图变化，抑制CK－MB、肌钙蛋白I（TnI）、肌红蛋白（Myo）的升高。提高血清SOD活性、降低MDA含量[16]。本实验发现在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血模型中，倍他乐克和通心络胶囊具有降低心肌酶的活性，降低T波振幅，改善心肌组织病变的作用。

本实验结果显示，碧血胶囊可以明显增高心重与体重的比值（P＜0.05），显著降低血清LDH、CK、MDA活性（P＜0.05），并显著增加SOD活性（P＜0.05），且能使T波振幅降低。心肌组织病变明显改善。降低心重与体重的比值，降低血清酶的活性和降低T波振幅方面优于倍他乐克，与通心络胶囊作用相似。但在改善心肌组织病理方面不如倍他乐克。

通过降低心重与体重的比值，提示碧血胶囊可以减轻心肌肥厚的程度，减轻心脏负荷。通过对SOD、MDA活性的影响，提示碧血胶囊可能干预自由基的产生并增强自由基清除剂的功能，维持心肌细胞氧化和抗氧化平衡，阻断脂质过氧化的链锁反应，发挥了抗心肌缺血损伤作用。通过降低LDH、CK等心肌酶，减少心肌细胞的死亡和炎症细胞的浸润，降低T波振幅，提示碧血胶囊可以减轻异丙肾上腺素所致的心肌损害。因此，可以改善心肌的收缩功能，改善心肌缺血。通过对病理组织的分析，也证实碧血胶囊确实可以改善组织病变。

总之，碧血胶囊对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血具有保护作用，其通过影响氧自由基和心肌酶改善心肌缺血的作用机制有待进一步研究。

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