干细胞因子及受体c－kit对A375细胞增殖和凋亡影响的体外研究

吴冬梅，岑 瑛

干细胞因子及受体c－kit对A375细胞增殖和凋亡影响的体外研究

吴冬梅，岑 瑛

目的 利用基因工程方法建立稳定表达干细胞因子受体(SCF/c-kit)的恶性黑素瘤A375细胞株，再给予外源性SCF/c-kit，观察其对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法 通过脂质体转染技术构建稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株（hc-kit/A375），给予A375细胞和hc-kit/A375细胞外源性SCF，将所有的细胞分为A375组、A375-SCF组、hc-kit/A375组和hc-kit/A375-SCF组。应用MTT法及流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡，并应用酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫组化方法检测肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)，基质金属蛋白酶(MMP)-9及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。结果 ①通过脂质体介导能将c-kit-pcDNA3.1 neo重组质粒成功转染入黑素瘤细胞，建立稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株hckit/A375，hc-kit/A375细胞中c-kit表达明显增加。②给予外源性SCF后，细胞的生长受到抑制，以培养后第5天尤为显著；细胞的凋亡率明显增加，S期比例降低，且hc-kit/A375-SCF组尤明显。③转染后细胞及加入SCF干预组VEGF、MMP-9分泌减少，而TNF-α的分泌增加。结论 通过脂质体转染和G418筛选成功构建稳定表达c-kit的A375细胞株；通过增加A375细胞中SCF/c-kit的表达能改变肿瘤细胞对VEGF、MMP-9、TNF-α的分泌，抑制肿瘤细胞的增殖，促进其凋亡。

黑素瘤，转移性；干细胞因子；受体，干细胞因子；稳定转染；A375细胞

[J Pract Dermatol, 2012, 5(4):193-198]

近年来，许多研究发现黑素瘤的发生、发展及转移与多种分子相关，如p53，bcl-2，Fas/Fasl，血管内皮生长因子（VEGF），基质金属蛋白酶（MMP）-9，干细胞因子受体/c-kit（SCF/c-kit）等。干细胞因子(stem cell factor，SCF)、肥大细胞生长因子 (mast cell growth factor，MGF)等，是1990年以来发现的一种重要的造血生长因子，主要由骨髓基质细胞 (包括脂肪细胞、成纤维细胞和内皮细胞)产生[1-3]。……