Vimentin介导LMP1在鼻咽上皮与鼻咽癌中的表达意义*

彭云吉 张志伟 赵强 刘重元 张婕 陈家明 贺修胜

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma， NPC)是我国南方和东南亚地区高发的恶性肿瘤之一，其发生与EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)感染有着密切的关系[1]。EBV编码的潜伏性膜蛋白1(latent membrane protein 1， LMP1)是公认的致瘤蛋白[2]。笔者前期采用双向凝胶电泳和质谱鉴定，筛选到LMP1调节的Vimentin蛋白[3]，为了解LMP1-CTAR3与调节蛋白质在组织中的相关性，本文采用免疫组织化学染色检测LMP1调节的Vimentin蛋白在鼻咽上皮和鼻咽癌中的表达，拟揭示蛋白质之间的相互作用规律。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2009年8月-2010年10月南华大学附一医院病理确诊的鼻咽上皮组织石蜡块30例(其中男18例，女12例，平均年龄35岁)和鼻咽低分化鳞状细胞癌组织石蜡块60例(其中男41例，女19例，平均年龄44.5岁)。

1.2 免疫组织化学染色 将制备好的石蜡切片58 ℃隔水式恒温培养箱中过夜；二甲苯脱蜡两次后水化；PBS洗片3次，每次3 min；将切片浸入盛有枸橼酸盐缓冲液容器中微波炉加热进行抗原修复；加3%过氧化物酶阻断液，37 ℃ 15 min；PBS洗片3次，每次3 min；加足量非免疫性动物血清，37 ℃ 10 min；分别滴加一抗(抗LMP1蛋白与Vimentin蛋白抗体均为福建迈新生物技术有限公司产品，编号：MAB-0063和 RMA-0547，克隆号：CS1-4和 SP20)，置湿盒中4 ℃冰箱过夜；滴加生物素标记的二抗，37 ℃ 15 min；滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，37 ℃ 15 min；DAB显色、苏木素复染、返蓝、脱水、透明，封片，显微镜观察、照相。

1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计学软件进行数据处理，Vimentin蛋白的表达采用 χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LMP1蛋白在鼻咽上皮组织及鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达 LMP1主要在细胞膜与细胞浆中表达(结果未显示)，其中鼻咽上皮细胞的表达率为73.3%，而鼻咽低分化鳞状细胞癌中表率为90%，提示慢性鼻炎和鼻咽低分化鳞状细胞癌患者中EBV感染率高。……