降钙素基因相关肽在大鼠切牙和牙周组织中的表达

张 静，吕琳琳，孙 静，陈家芳，李 纾，2

(山东济南250012:1.山东大学口腔医学院;2.山东大学口腔医学重点实验室)

降钙素基因相关肽(CGRP)是一种具有强大扩张血管作用的生物活性多肽［1］，广泛分布于周围、中枢神经系统和心血管系统。近年来研究显示:CGRP在口腔组织中的分布具有不可忽视的意义，其在正常牙髓中的阳性表达，提示这类神经肽具有神经递质和放大刺激传入信号的作用，从而导致疼痛和过敏症状［2］，同时CGRP还可调节牙髓中的血管生成以修复牙髓组织。此外，CGRP在口腔种植和正畸治疗的牙槽骨愈合过程中也扮演着重要角色，并且受到了越来越多的关注。但是关于CGRP作为一种神经性因子在牙齿硬组织发育过程中的作用研究和报道较少。本研究通过观察CGRP在大鼠切牙成釉细胞、成牙本质细胞和牙周膜细胞中的组织学定位和表达，为进一步研究CGRP在牙齿硬组织发育调控过程中的意义提供理论基础。

1 材料和方法

1.1 主要材料和仪器

6周龄雄性Wistar大鼠(山东大学动物中心提供);CGRP一抗(abcam，美国);山羊超敏二步法免疫组化检测试剂盒、DAB显色试剂盒、胰蛋白消化液(北京中杉金桥生物技术有限公司);LEICA RM2135切片机(德国);OLYMPUS BX71显微镜和照相系统(日本)。

1.2 取材和标本处理

取6周龄雄性 Wistar大鼠，水合氯醛注射［0.4 mL/100 g(体质量)］麻醉后用40 g/L多聚甲醛心脏内灌注处死并内固定，取双侧下颌骨置40 g/L的多聚甲醛中再固定12 h，流水冲洗1 h后置100 g/L的EDTA液中脱钙60 d，经针刺无阻力后终止脱钙。取含切牙的组织块，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋，颊舌向连续切片(片厚5 μm)，展片后用多聚赖氨酸预处理的载玻片捞片，烤片3 h后置4℃冰箱内保存备用。……