柑橘溃疡病土壤拮抗菌的筛选、鉴定及防效测定

董玉兰，唐前君，易图永，肖启明

（湖南农业大学生物安全科技学院，湖南 长沙 410128）

柑橘溃疡病是一种细菌性植物病害，因导致植株枝叶及果实产生溃疡性病斑而得名，公认为世界性的检疫病害，对农业生产造成巨大损失[1]。近年来，柑橘溃疡病的防治已经由最初的化学防治转向更具优势的生物防治[2]。生物防治的优势在于其防治剂只对有害病菌起作用，不仅可避免化学药物对农产品的污染，而且可保护生态环境免遭破坏[3]。而拮抗微生物的利用又是生物防治措施中的研究重点。有报道称可从柑橘叶片、果实及柑橘园土壤中分离出有拮抗作用的菌株[4-5]，因此笔者采集了湖南不同地区的土壤，拟从中分离纯化出对柑橘溃疡病菌有拮抗作用的微生物，再通过筛选及室内防效测试，选取防效最好的菌株，为制备柑橘溃疡病生物防治剂做准备。

1 材料与方法

1.1 试验材料

通过5 点取样法分别于慈利、郴州、永州、长沙等地的水稻、烟草、柑橘产区采集了16 个土壤样品；供试病原菌和供试柑橘苗（脐橙）由国家柑橘改良中心长沙分中心提供；供试培养基有牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号培养基（放线菌）、PDA 培养基（真菌）。

1.2 试验方法

1.2.1 拮抗菌分离与纯化 取各种土样10 g，放入装有90 mL 无菌水（有玻璃珠）的三角瓶中，震荡1 h；将菌悬液依次稀释；细菌采用混匀法，真菌和放线菌采用涂沫法进行分离纯化[6-7]。从采集到的16个土样中，共分离出细菌167 株，放线菌92 株，真菌88 株，总计347 株，用于拮抗试验。……