壳聚糖温敏凝胶与富含血小板血浆共混后的微观结构

惠光艳，吴广升，关继东，刘丽霞，贾文敏，王 潍

将组织工程技术引入牙周组织再生治疗，为牙周组织缺损的修复和再生开辟了新的研究空间[1]。寻找合适的支架材料是目前牙周组织再生研究的重要方面。壳聚糖温敏凝胶是一种新型可注射型温敏凝胶，因其优秀的生物学特性，如：生理中性，37℃时可以形成半固体凝胶，可降解性，对大分子药物的缓释性，可以作为活细胞的载体并保持细胞的活性等特点在医学、生物学领域得到了越来越多的关注[2-4]。但壳聚糖温敏凝胶的孔径一般为50 μm左右，远小于理想支架材料孔径的要求。富含血小板血浆（PRP）含有大量的生长因子和丰富的纤维蛋白网络，孔径较大，约为200～800 μm，并已经作为支架材料应用于骨组织工程中[5]。本实验将壳聚糖温敏凝胶与PRP共混，希望使壳聚糖温敏凝胶孔径不仅增大到适宜细胞生长的要求，又可以缓慢释放PRP内的各种生长因子，为其作为支架材料应用于牙周组织再生进行初步研究。

1 材料和方法

1.1 主要试剂与仪器 医用级壳聚糖（博益特生物公司，脱乙酰度91%，青岛），β-甘油磷酸二钠（Sigma，美国），牛凝血酶（Sigma，美国），48 孔板（Corning，美国），乙酸（优级纯，国药集团），磁力搅拌器（正基仪器有限公司，江苏），振荡搅拌器（跃进医疗器械厂，上海），冷冻干燥机（FTS，System公司，美国），扫描电镜（KYKY-2800B，中科院科学仪器厂，北京），离心机（飞鸽，北京）。

1.2 方法

1.2.1 壳聚糖温敏凝胶的制备 参考文献 [6]，将0.2 g壳聚糖加入8 ml 0.1 mol/L乙酸溶液中，磁力搅拌器上持续搅拌2 h；0.56 g β-甘油磷酸二钠溶于2 ml双蒸水中后，两种溶液冰浴15 min，并将β-甘油磷酸二钠逐滴加入到壳聚糖溶液中，并持续搅拌10 min。……