靶向Ku70基因siRNA对人肺腺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用

黎 萍，张 捷，李亚荣，王 珂，苏振中

(1.吉林大学第二医院呼吸内科，吉林 长春 130041；2.吉林大学第二医院血液肿瘤科，吉林 长春 130041)

肺癌中80%～85%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，化疗是NSCLC临床治疗的主要方法之一，以铂类为基础的联合化疗是NSCLC的标准化疗方案，而肺癌内在性或获得性耐药严重影响顺铂的临床化疗效果[1]。肺癌顺铂耐药机制复杂，与P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽S-转移酶Ⅱ等多药耐药因子表达呈正相关[2]；与血清p53抗体及谷胱甘肽S-转移酶阳性表达呈负相关[3]。近年研究[4-5]表明：DNA修复相关分子以及凋亡信号途径的异常是肺癌顺铂耐药的重要机制之一。Ku70是DNA结合蛋白，是DNA磷酸蛋白激酶的重要成分，参与DNA转录调节，可独立参与细胞DNA修复并具有抗凋亡作用[6]。研究[7]表明：Ku70的表达水平与头颈部肿瘤放、化疗后复发率呈正相关，此外Ku70与甲状腺癌[8]、宫颈癌[9]放疗敏感性有关。本研究比较Ku70在人肺腺癌细胞系亲代(A549)与人肺腺癌耐顺铂细胞系(A549/DDP)的表达水平，观察siRNA靶向沉默Ku70后A549/DDP细胞在顺铂作用下的增殖、凋亡情况，特别是耐药性的变化，以期为肺癌顺铂耐药提供潜在的分子标志物，为临床逆转肺癌顺铂耐药、提高化疗疗效寻找有效的分子靶点奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要试剂人肺腺癌细胞系亲代(A549)及其耐顺铂细胞系(A549/DDP)均购自第三军医大学新桥医院呼吸病研究所。dNTP、MMV逆转录酶购自Promega公司；Ex-Taq、DL-2000 DNA marker为Takara公司产品；MTT、顺铂购自美国Sigma公司；Lipofectin 2000及 Trizol为美国Invitrogen公司产品；胰酶、IMDM培养基为美国Hyclone公司产品；人Ku70抗体、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔多克隆抗体购自Santa-cruz公司；……