基质金属蛋白酶－2在结肠腺癌组织中的表达

周竞奇，李维山

(1.济源市人民医院，河南济源454650;2.漯河医学高等专科学校，河南 漯河462000)

结肠癌是人类常见的恶性肿瘤之一，近年来其发病率有上升的趋势，患者的预后与结肠癌细胞的浸润转移有密切关系。基质金属蛋白酶－2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)的过度表达与恶性肿瘤的转移密切相关［1］。本实验利用组织芯片技术，在一张玻片上一次性完成本研究所采集的组织标本的免疫组织化学标记，检测59例结肠腺癌组织中MMP-2的表达，探讨其在结肠腺癌组织中的表达情况及与临床病理参数之间的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选自济源市人民医院和济源市第二人民医院病理科2006年至2010年存档材料。59例结肠腺癌患者均经复查和病理确诊。患者年龄35～65岁，平均年龄45岁。其中高分化16例，中分化25例，低分化18例;并选取正常结肠组织10例作为对照。标本经体积分数10%中性甲醛固定，石蜡包埋。

1.2 主要试剂 单克隆抗体MMP-2购自福州迈新公司，S-P二步法试剂盒和DAB显色剂购自北京中杉生物公司。

1.3 组织芯片的手工制作 用手电钻在空白蜡块上构建10×9个点阵，间距2 mm。用空心针(内径1.8 mm)把目标组织穿刺取下圆柱状标本，分别种植到对应的点阵中，在38℃恒温箱中烘烤2 h，与空白蜡块融合为一体。

1.4 免疫组织化学 采用S-P二步法，严格按照免疫组织化学检测试剂盒说明书指导步骤进行染色:将构建的芯片蜡块以5 μm厚连续切片，常规脱腊至水，体积分数3%H2O215 min阻断内源性过氧化物酶活性，置入有 0.01 mol·L－1枸橼酸盐缓冲液(pH 6.0)的高压锅内加热进行抗原修复(从高压锅开始慢慢喷气时，计时3 min)，迅速冷却后洗涤。……