MALDI-TOF-MS 技术筛查原发性小肝细胞癌血清特异蛋白

李 珂，何伟华，赵 光，独建库，孙高斌，彭 玲，高春芳

基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ionization-time of flightmass spectrometry，MALDI-TOF-MS）技术主要应用在蛋白质和蛋白质组学研究并直接获取某种疾病的特征性生物学标记。目前，利用MALDI-TOF-MS技术发现肿瘤的特殊生物学标记，对多种肿瘤的早期诊断研究中显示出良好的应用前景[1-6]。原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma，PHC）是国内外最常见的恶性肿瘤之一，肝癌在我国的发病率及病死率有逐年增高的趋势[7，8]。中晚期肝癌诊断并不困难，但临床治疗预后不佳，故肝癌早期诊断即小肝癌诊断对肝癌治疗及预后起着至关重要的作用，也一直被临床和科研工作者所关注。寻找具有高灵敏度和高特异性的原发性肝癌特异性肿瘤标志物则是原发性肝癌早期诊断的关键所在。运用MALDI-TOF-MS技术对原发性小肝癌患者与正常人血清蛋白质谱进行分析，得到高敏感性和特异性的血清蛋白，建立小肝癌诊断模型指纹图谱，为肝癌的临床治疗及预后评估提供更积极的因素。

1 资料与方法

1.1 对象及分组 选取解放军第150医院2007-09～2009-12收治的小肝癌患者35例 （均未做任何干预性治疗），影像学报告肝肿瘤直径<5 cm（以2001年中华医学会定义小肝癌标准，不严格区分微小肝癌与小肝癌），且超声引导经皮穿刺活检病理诊断报告为原发性肝癌；男23例，女12例，男女比例 1.92∶1；年龄 27～79 岁，平均 56 岁；按照 TNM 标准进行分期，Ⅰ期34例，Ⅱ期1例；按照Child-Pugh分级标准，A级30例，B级5例；甲胎蛋白（AFP）<20μg/L 者 5例， 20～200μg/L者 17例，>200μg/L者13例；有乙型肝炎、肝硬化病史29例。正常对照组共50名，为2007-09～2010-09健康体检者，男 31名，女 19名，男女比例 1.6∶1；年龄 25～83岁，平均58岁（对照组年龄与小肝癌组年龄无统计学差异）；AFP正常，均无肝炎及肝硬化病史。

1.2 试剂仪器及方法

1.2.1 试剂仪器 试剂为铜螯合磁珠悬浮液、铜螯合磁珠结合缓冲液 （BS）、铜螯合磁珠清洗缓冲液（WS）、铜螯合磁珠洗脱缓冲液（ES）基质（3mg/ml CHCA，50%ACN，2%TFA）等。……