单胚胎RT-qPCR对猪体细胞核移植囊胚全能性的分析

吉林大学畜牧兽医学院 谢万华 陈仙菊 姚朝刚 韩 阳 逄大欣 唐晓春

体细胞核移植技术现已成功应用到牛、小鼠、猪、兔和狗等多种哺乳动物，其在生物医学和生命科学研究等领域具有较大价值。然而，体细胞核移植技术存在克隆效率低下，大量的克隆动物出生后就死亡，或者各种器官发育不正常等问题。有研究认为，克隆动物发育不正常主要是供体细胞核重编程不完全导致的 （Hochedlinger和Jaenisch，2003）。处于分化状态的供体细胞核需要通过卵母细胞中一些重编程因子的作用将其转化为胚胎的去分化状态才能继续发育。目前关于重编程的机制了解甚少。研究发现，重编程因子是通过调控一些关键基因的表达从而维持正常的发育（Tamashiro等，2002）。因此，通过对胚胎发育中关键基因的研究，可以揭示发育的机制。然而，胚胎间的发育是相对独立的过程，即使在同一母体内，受精卵的发育也不是同步进行的，各个胚胎中基因的表达存在很大差异。而传统的基因表达研究方法需要从大量的样品中获取模板，极大的限制了其对微量样品的研究，如胚胎的发育。因此，有必要从单胚胎水平来研究胚胎的发育（Stahlberg等，2011；Wang 和 Bodovitz，2010）。 本试验从单胚胎水平，分析了猪体细胞核移植囊胚和体内囊胚中全能性基因（Oct4、Nanog和 Sox2）的表达量，同时还比较了这两种囊胚的质量。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 猪卵巢和动物 猪卵巢采自长春市绿园区屠宰场。试验动物为怀孕33～35 d的长白母猪和人工授精5 d的长白母猪，均来自吉林大学种猪场。……