结核杆菌19 ku脂蛋白的表达与纯化

胡 松，张莹莹，秦 琴，赵佩莹，毕建平，黄继良

（江汉大学 医学院，湖北 武汉 430056）

据WHO的报告，全球现有结核病人约2000万，结核病在世界很多地区流行，结核再次成为严重的世界性疾病［1］。结核分枝杆菌（Mycobacte⁃rium tuberculosis）属胞内寄生菌，在感染早期被巨噬细胞吞噬后，可抵抗宿主的杀伤，维持结核杆菌胞内繁殖和扩散，结核病的发生与发展与结核杆菌在巨噬细胞中的生存有直接关系。近来，结核分枝杆菌细胞壁上的一种相对分子质量19 ku（p19）的脂蛋白被证实可以对巨噬细胞中IFN-γ依赖的抗原递呈途径干扰［2］，p19是一种主要存在于结核杆菌细胞壁上的糖基化脂蛋白，被认为是细菌毒力因子之一［3］，具有一定的免疫原性。该蛋白可诱导机体产生特异性抗体，激发T细胞介导的免疫反应，其编码基因存在于结核杆菌和卡介苗中，全长为479 bp。

本实验拟通过克隆卡介苗中的脂蛋白19 ku编码基因，构建原核表达质粒pET28a-p19，在大肠埃希菌BL21中诱导表达，经镍柱纯化后得到约为19 ku的融合蛋白，为实验后期进一步研究做前期准备。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒与菌株 大肠埃希菌DH5α与大肠埃希菌BL21为本室保存，卡介苗购自武汉市疾控中心。原核表达质粒pET28a由江汉大学罗峰博士惠赠。

1.1.2 试剂 限制性内切酶BamHI、HindIII、T4DNA连接酶、蛋白分子量标准购自Fermentas公司，玻璃奶胶回收试剂盒购自博大泰克公司，蛋白质纯化层析树脂（Ni-NTA）购自GE公司，2X Taq Mix、DNA Marker DL6000、小量质粒提取试剂盒、改良罗氏培养基购自大连宝生物工程有限公司。

1.1.3 引物合成 引物由上海生物工程技术服务有限公司完成。……