利用气相色谱法同步测定饲料香味剂中四种成分的研究

李会荣

（山东省饲料质量检验所 济南 250022）

饲料香味剂作为诱食剂，能把动物吸引到饲料周围，并使之产生饥饿感、自在感，刺激唾液和消化液的分泌；能提高适口性，保证动物在高温、断奶、运输、疾病等应激状态下的采食量；能有效掩盖饲料中的不良味道，使饲料充满香甜气味；能产生均一的气味，使畜禽顺利适应饲料配方和饲料原料的改变，促进幼龄动物提前断奶，提早采食；还可以作为一种产品标记，使饲料产品更具竞争力。

国内外香味剂的检测，主要是以气相色谱或液相色谱为核心的检测技术，近几年我国食品行业也相继发布了一些单一香味剂的产品标准及检测方法。我国市场上销售的饲料香味剂种类众多，但目前尚无单一饲料香味剂的产品标准及检测方法，更没有饲料香味剂中多种成分同步检测的方法。本研究针对饲料香味剂添加成分繁多复杂的特性，参照食品中单一香味剂的检测方法，建立了气相色谱法同步检测饲料香味剂中乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的方法，同时对方法的检出限、准确度和精密度等进行了试验验证。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 分析纯无水乙醇。

1.1.2 仪器和设备 分析天平（感量0.1mg）；Agilent6890N气相色谱仪（具有FID检测器和可程序升温的柱温箱）。

1.1.3 标准物质 乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯标准品纯度大于98%。（1）乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯混合标准贮备溶液：准确称取乙基香兰素0.1000g、乙基麦芽酚0.1000g于10ml棕色容量瓶中，加5ml无水乙醇溶解后，再准确量取椰子醛0.10ml、乙酸异戊酯0.10ml，用无水乙醇定容。该溶液中乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的浓度均为10mg/ml。2～8℃保存，保质期1个月。（2）乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯混合标准中间溶液：准确移取乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯混合标准贮备溶液1ml，置于10ml棕色容量瓶中，用无水乙醇定容。该溶液中乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的浓度均为1mg/ml。2～8℃保存，保质期1周。（3）乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯混合标准工作溶液：准确移取适量乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯混合标准贮备溶液（1）和混合标准中间溶液（2），分别配制成浓度为0.01、0.10、0.20、0.50、1.00和2.00mg/ml的混合标准工作溶液。现用现配。

1.2 方法

1.2.1 气相色谱参考条件 色谱柱：HP-5或同等效果的柱子，30m×0.25μm；进样口温度：240℃；不分流进样；载气流速：8.0ml/min；柱温箱温度：起始60℃，保持2min，以30℃/min的速率升温至200℃，保持2min；检测器温度：260℃。试验结果见图1。结果表明：该色谱条件均能满足色谱分析的需要。

图1 乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯混合标样图谱

1.2.2 提取条件的确定 由于检测的四种物质均能溶解于无水乙醇[1-5]，因此选用无水乙醇作为提取剂。用空白的载体，添加不同浓度的乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯，选用振荡器、旋涡混合器和手动振摇三种不同的方法提取后，上机测定其回收率。由于不同提取方式的回收率几乎相同，且考虑到检测的这四种物质均有挥发性，处理的步骤越简单越好。因此，选用处理简单且不需要其它辅助设备的手动振摇提取方式。即准确称取试样适量（精确至0.0002g）（使待测溶液中所测物的含量控制在0.01～2.00mg/ml之间），置于10ml棕色容量瓶中，加5ml无水乙醇，振荡混匀，用无水乙醇定容至刻度。混匀后静置。取上清溶液，溶液过0.45µm的微孔滤膜，供上机测定。

2 结果

2.1 方法的线性范围

将标准工作溶液依次从低浓度到高浓度进样，每一浓度进样三针，按其所得峰面积的平均值与对应的标准溶液浓度（mg/ml）作标准曲线，计算出回归方程和相关系数。试验结果见图2。结果表明：乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯标准工作溶液在0.01～2.00MG/ML浓度范围内有良好的线性关系，相关系数均达到0.99以上。

图2 乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯标准曲线

2.2 标准溶液重复性

用1.00mg/ml乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的混合标准中间溶液连续进样6次。试验结果见表1。结果表明：同一浓度的标准溶液有较好的重复性，其RSD%均小于5.0%。

表1 混合标准中间溶液重复性检测 （%）

2.3 最低定量限的确定

在空白载体中分别添加乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯各100mg/kg，试验结果见图3和表2。结果表明：在添加量为100mg/kg时，其回收率为80%以上，而添加量为100mg/kg以上其它浓度的回收率也均在80%以上。由于该方法中采用程序升温的色谱条件，当添加量小于100mg/kg时，其信噪比不能满足定量的要求，所以，将该方法的最低定量限定为100mg/kg。目前市场上常见的饲料香味剂中乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的配方含量在2～100g/kg之间。所以，该定量限完全可以满足实际生产中产品含量检测的要求。

图3 空白载体中添加乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯100mg/kg色谱图

表2 方法最低定量限确定的检测结果回收率 （%）

2.4 方法的准确度和精密度的测定

在空白载体中分别添加各100mg/kg、1000mg/kg、2000mg/kg、3000mg/kg、4000mg/kg、5000mg/kg和10000mg/kg浓度的乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯，每个浓度做4次重复，分别计算回收率。试验结果见表3。在添加不同浓度的乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯时，不同的添加浓度均可得到较高的回收率，且相对标准偏差均小于10%。

2.5 方法的适用范围

为考察本方法的适用性，从市场上收集了3个生产厂家的6个饲料香味剂样品，其中2个果香型，2个奶香型，但这4个样品无具体的含量规定；另2个样品有标签，测定结果均大于样品添加含量的标示量。检测结果见表4。结果表明：不同的生产厂家、不同成分的香味剂均可用该方法检测。

表3 空白载体中添加回收的检测结果 （%）

表4 方法适用范围的验证含量 （mg/kg）

2.6 干扰试验

为考察其它香味剂是否对该方法有干扰，分别用浓度为2.00mg/ml桃醛（丙位十一内酯）和丁位葵内酯标准溶液，在与乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯相同的提取和色谱条件下上机测定，各种香味剂的出峰时间见表5，桃醛和丁位葵内酯的图谱见图4和图5。试验显示，乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯与桃醛和丁位葵内酯的色谱峰有很好的分离，且对其定量无影响。结果表明：桃醛和丁位葵内酯对乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯的测定均无干扰。

表5 各种香味剂及出峰时间

图4 桃醛（丙位十一内酯）图谱

图5 丁位葵内酯图谱

3 结论

以上试验结果表明：本研究建立的饲料香味剂中乙基香兰素、乙基麦芽酚、椰子醛和乙酸异戊酯同步检测方法，色谱条件易于掌握，仪器性能稳定，测试数据重复性好，回收率高，精密度和准确度均能满足分析要求，且具有较好的定量限。