基于FRET技术的TβRI生物传感器载体的构建

陈召，刘伟，王维山，曹薇薇，何建伟，史晨辉

（1石河子大学医学院第一附属医院骨一科，石河子832000；2新疆地方民族与地方病教育部重点实验室，石河子832000；3石河子大学医学院第一附属医院检验科，石河子832000）

骨性关节炎（Osteoarthritis，OA）是一种严重影响人类健康的退行性关节疾病之一，它以关节软骨的慢性进行性退行性变和软骨下骨质的重塑、硬化为特征［1］。在OA病因、发病机制中，转化生长因子β（Transforming growth factorβ，TGFβ）信号转导通路产生了重要的作用。

TGFβ为具有多功能的细胞因子，是骨代谢过程中在骨吸收部位促进新的骨基质形成的一个重要偶联因素，也已经成为治疗该疾病研究的重要靶点［2］。TGFβ作为一种多功能细胞因子，其生物学作用的发挥，依赖于与细胞膜上的特异受体结合［3］。TGFβ通过与I型受体（Type I TGFβreceptor，TβRI）和Ⅱ型受体（TypeⅡ TGFβreceptor，TβRⅡ）结合，直接或间接与其它转录因子协同影响靶基因的转录，调控细胞的增殖、分化、凋亡、移动等生命功能。

本研究克隆人TβRI基因，借助包含有ECFP、YFP荧光蛋白的Src生物传感器（Biosensor）载体，构建荧光蛋白融合表达载体的TβRI生物传感器载体，通过测序及酶切鉴定验证。将TβRI生物传感器载体转染293T细胞，并在激光扫描共焦显微镜下观察细胞情况。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1质粒与实验材料

大肠杆菌DH5α为本实验室保存；人胚肾上皮293T细胞由石河子大学医学院黄瑾教授惠赠；Src生物传感器载体质粒由美国约翰霍普金斯大学曹旭教授惠赠；经医院伦理委员会通过并患者及其家属同意，肝脏组织取自肝破裂患者。

1.1.2主要试剂