趋化性细胞因子CCL3L1基因拷贝数与HIV－1易感性研究

徐 斌，石 英，惠 威，何佳丽，魏琳琳，王 征，陈德喜

（首都医科大学附属北京佑安医院 肝病内分泌科，北京100069）

获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS）简称艾滋病，是由 HIV（Human Immunodeficiency Virus）病毒引起的一种传染性疾病。HIV病毒侵入人体后破坏机体的免疫系统，引起一系列严重疾病，病后无特效疗法，病死率高。人类第17号染色体的16个基因组由两对亲缘关系很近的基因组构成，即CCL3L—CCL3L1和CCL4—CCL4L1。CCL3和CCL3L1蛋白93个氨基酸中有88个相同，这两个蛋白均是CCR5受体的配体，在体外试验中均可抑制 HIV－1病毒复制［1］。影响HIV－1易感性的宿主因素很多，人们由早期对HLAⅠ等位基因、CCR5和CCR2基因变异的关注，转向CCR5结合细胞因子水平的不同。本研究探讨CCL3L1基因拷贝数不同对HIV－1易感性的影响，有助于监测个体对HIV－1的易感性，对监测疫苗的有效性具有重要意义。

1 资料与方法

1.1 健康人群 2005年5月至2006年10月间，北京佑安医院血库，采集97例健康献血原的抗凝全血。其中男66例，女31例，平均年龄36±18岁。

1.2 HIV／AIDS患者 2005年5月至2006年10月间，北京佑安医院门诊或住院的HIV／AIDS患者81例，男性54例，女性27例，平均年龄37±1.2岁。所有患者均为血液传播感染并未经高效抗逆转录病毒治疗，病程平均6.2±0.3年。

1.3 实验方法

1.3.1 基因组DNA提取 按QIAamp DNA Mini Kit基因组提取试剂盒说明书步骤进行。

1.3.2 实时定量PCR检测CCL3L1基因拷贝数引物选择：（1）CCL3L1引物：sense primer：5’－tctccacagcttcctaaccaaga 3’；antisense primer：5’－ctggacccactcctcactgg 3’。（2）管家基因β－globin引物：sense primer：5’－ggcaaccctaaggtgaaggc 3’；antisense：5－ggtgagccaggccatcacta 3’。

以上引物由宝生物公司合成。SYBR反应体系：5×SYBR Green 25μl，引物（25μmol／L）2.5 μl，dNTP（10mmol／L）4.0μl，Mg2＋4.0μl，cDNA1.0μl，Taq酶0.25μl，H2O 5μl，10×buffer 5.0μl。反应条件：92℃2min预变性，92℃30s变性，55℃30s退火，72℃30s延伸，35个循环，72℃7min。反应结束后，由电脑自动分析并计算结果。

1.3.3 HIV／AIDS患者血浆中 HIV RNA水平的定量检测 采用bDNA法进行检测。使用德国Bayer公司的System 340bDNA分析仪，试剂采用厂家配套试剂。……