Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞神经分化中的作用*

王舒阳， 韩 瑞， 张广宇， 王翠琴， 彭 越， 鲁晶晶， 彭 涛， 贾延劼

(郑州大学第一附属医院神经内科, 河南 郑州 450052)

1000-4718(2012)03-0385-08

2011-10-13

2011-11-28

国家自然科学基金资助项目(No.30770758；No.81071114)

△通讯作者 Tel：0371-66295112; E-mail:jiayanjie1971@yahoo.com.cn

·论著·

Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间质干细胞神经分化中的作用*

王舒阳， 韩 瑞， 张广宇， 王翠琴， 彭 越， 鲁晶晶， 彭 涛， 贾延劼△

(郑州大学第一附属医院神经内科, 河南 郑州 450052)

目的探讨Oct3/4在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元中的作用。方法构建大鼠Oct3/4慢病毒载体(Oct3/4-LV)并感染大鼠MSCs；实验分为感染组(感染Oct3/4-LV)、阴性对照组(感染FU-PGC-NC-LV)和未感染组3组；采用β-巯基乙醇诱导各组大鼠MSCs分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后形态学变化；MTT法检测细胞存活率；免疫细胞化学法检测神经元烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白 2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 和Oct3/4的表达变化；Western blotting法检测MAP-2和Oct3/4蛋白的表达变化；RT-PCR法检测MAP-2和Oct3/4 mRNA的表达变化。结果(1)阳性克隆PCR证明大鼠Oct3/4慢病毒载体构建成功，孔稀释法测定病毒滴度为2×1011TU/L。(2)倒置显微镜下观察大鼠Oct3/4慢病毒载体感染成功，感染复数(MOI)值为10，感染48 h时感染率最高，荧光表达最强；感染率可达83.4%±2.2%。感染组中，MSCs形态发生变化；MTT提示感染组细胞存活率显著降低(P<0.05)。(3)β-巯基乙醇可以诱导大鼠MSCs向神经元分化，其中以感染组诱导效果最佳，具有比较典型的神经元形态，NSE和MAP-2的表达率与其它各组相比显著增高(P<0.05)。(4)感染组与其它各组同时点的Oct3/4表达相比均显著增高(P<0.01)。并且随着诱导时间的延长，各组Oct3/4表达持续减少，诱导后5 h与诱导前相比存在显著差异(P<0.05)。结论Oct3/4在大鼠MSCs分化为神经元的过程中可能起到了重要的调控作用。

Oct3/4； 骨髓间充质干细胞； 神经元； 慢病毒

Oct3/4是POU域家族转录因子中的一员，主要表达于胚胎干细胞及生殖细胞中，是胚胎干细胞多潜能性的维持因子和生殖系细胞的调控因子，是目前已知的与胚胎发育全能性相关的重要转录因子，是哺乳动物体内全能性胚胎干细胞的标志物[1]。骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一种具有多向分化潜能的干细胞，在特定条件下可以向神经元等分化[2]，但具体分化机制尚不清楚。……