以组织因子为靶点的肿瘤免疫治疗结合物的合成及其对结直肠癌细胞的影响

许 希, 饶本强, 梁绮雯 刘 丹, 谭 获, 汪建平△, 黄振倩△

(1广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心，广东 广州 510230；2中山大学附属第六医院，广东 广州 510655)

1000-4718(2012)03-0420-07

2011-07-31

2011-12-21

△通讯作者 汪建平 Tel:020-38250737; E-mail:wangjpgz@yahoo.com.cn; 黄振倩 Tel:020-34294310;E-mail:huangzq2003@yahoo.com.cn

▲并列第1作者

以组织因子为靶点的肿瘤免疫治疗结合物的合成及其对结直肠癌细胞的影响

许 希1▲, 饶本强2▲, 梁绮雯2刘 丹1, 谭 获1, 汪建平2△, 黄振倩1△

(1广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心，广东 广州 510230；2中山大学附属第六医院，广东 广州 510655)

目的构建含hFVII-LC+hIgG1-Fc cDNA的重组真核表达载体，并转染中国仓鼠卵巢细胞亚株CHO-K1获得以组织因子(TF)为靶点的免疫治疗结合物用于肿瘤的靶向治疗。方法用分子生物学方法从汉族人肝组织和淋巴细胞中分别获得hFVII-LC和hIgG1-Fc DNA片段并用连接酶正向克隆入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中。以脂质体法转染阳性质粒入CHO-K1细胞，G418加压筛选获得阳性单克隆细胞；Excel 301无血清培养液扩大培养， 培养液Ni-NTA亲和层析纯化和制备hFVIII-LC+hIgG1-Fc融合蛋白，ELISA法检测该融合蛋白与TF的靶向作用，免疫激活物与结肠癌细胞HT-29及NK细胞混合培养检测结合物激活NK细胞的能力。结果以汉族人肝组织和淋巴细胞为模板扩增的hFVII-LC和hIgG1-Fc DNA片段经测序证实与基因库报道的系列完全一致；经酶切分析、测序证实构建的hFVII-LC+hIgG1-Fc融合基因片段完整地落在真核表达质粒pcDNA3.1(+)的阅读框架中；LipofectamineTM2000转染试剂能获得含pcDNA3.1(+)-hFVII-LC+hIgG1-Fc阳性的CHO-K1细胞，经1 g/L G418加压筛选可以获得分泌hFVII-LC+hIgG1-Fc融合蛋白的单克隆细胞株；1L Excel 301无血清培养液用Ni-NTA亲和层析纯化可以制备1.3 mg hFVII-LC+hIgG1-Fc融合蛋白，经ELISA法鉴定与TF具有高亲和力，免疫激活物与结肠癌细胞HT-29及NK细胞混合培养表现出明显的激活NK细胞的能力。……