白藜芦醇对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖的影响及其机制

张千帆 刘瑞敏 穆红梅 郭 洋 申 飞 刘 莹

视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是婴幼儿中最常见的眼内恶性肿瘤，严重危害患者的视力和生命，约84%发生于3岁前，若能给予及时治疗，患儿存活率可达95%[1]。近年来随着RB治疗方法的不断改进，人们更关注的不再是降低死亡率，而是保留患者的眼球和有用视力来提高患者生存质量，因此寻找行之有效的化疗药物具有十分重大的意义[1-2]。白藜芦醇(resveratrol，Res)是近年来发现的非黄酮类多酚化合物，有研究证实其能够杀死多种肿瘤细胞[3]，但尚未见其对人RB细胞系作用的报道。本文旨在研究Res对人RB Y79细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响，并探讨其抗肿瘤活性的机制，为其临床应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人RB Y79细胞株购自中国科学院上海细胞所细胞库。RPMI 1640培养基购自Gibco公司。小牛血清购自杭州四季青公司。Res购自Sigma公司，Annexin V-FITC、碘化丙啶(propidium iodide，PI)染料和二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)试剂购自Sigma公司。NF-κB/p65、Survivin和 β-actin抗体均购自Santa Cruz公司(美国)。辣根过氧化酶标记物山羊抗小鼠IgG(二抗)和碱性磷酸酶显色试剂盒购于北京中山生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养和药物处理 Y79细胞接种于含体积分数15%胎牛血清的RPMI 1640培养液中(含100×103U·L－1青霉素和链霉素)。置37℃、含体积分数5%CO2、饱和湿度的恒温培养箱中传代培养，取对数生长期细胞用于实验。Res用DMSO溶解配制为100 mmol·L－1，过滤除菌后－20℃保存备用。

1.2.2 细胞计数法检测Res对Y79细胞增殖的抑制作用 取对数生长期的Y79细胞，调整细胞浓度为109L－1接种于24孔板。加入含Res终浓度为25 μmol· L－1、50 μmol· L－1、100 μmol· L－1、200 μmol·L－1的 RPMI 1640 完全培养基，同时设置阴性对照和空白对照，每组均设3个复孔。……