睾酮诱导牛眼小梁细胞组织型谷氨酰胺转移酶的表达

陈 慧 胡义珍 柯晓云 陈晓虹

流行病学研究表明原发性青光眼患者男∶女为1.00∶1.01，其中，原发性闭角型青光眼患者男∶女为1.00∶1.53，而原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma，POAG)男 ∶ 女 为 2.55∶1.00[1]。这种差异的存在提示POAG发病与性激素可能存在一定的关系。Agapova等[2]发现雄激素可能与青光眼发病有重要联系。眼是性激素作用的靶器官，睾酮在POAG的发病过程中是否起到一定的作用，是本次研究的重点之一。已有研究证明组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase，tTG)与POAG发病密切相关[3-6]。那么，雄激素的存在，是否可以通过上调tTG在小梁细胞中的表达，从而在POAG的发展过程中起作用，是本次实验的研究重点。

1 材料与方法

1.1 材料 新生牛眼球来自武汉市牛羊加工厂，2 h内用冰瓶运回实验室进行细胞培养。胎牛血清(Hyclone公司)，DMEM+F12培养基(Gibco公司)，鼠抗人Ⅳ型胶原蛋白、鼠抗人纤维连接蛋白、鼠抗人层粘连蛋白(Gibco公司)，鼠抗人tTG(美国Labvision公司)，SP二抗试剂盒(福州迈新公司)，睾酮注射液(天津金耀氨基酸有限公司)，Trizol试剂(Sigma公司)，逆转录试剂盒(TOYOBO公司)，引物由上海生工生物技术有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 牛眼小梁细胞的体外培养及鉴定 在超净台内剪去眼周围的筋膜组织后，将其浸泡于0.2×10－6g·L－1氧氰化汞 +4000 U·mL－1庆大霉素的水溶液中30 min。D-Hanks液冲洗眼球3次后，显微镜下分离取出小梁组织切成1 mm×2 mm的碎块，均匀地贴于培养瓶的瓶底。将培养瓶在37℃、体积分数5%CO2恒温箱内倒置3 h后，待组织块贴壁微干后，加入体积分数20%胎牛血清DMEM培养液适量。将培养瓶放入37℃、体积分数5%CO2恒温箱内进行培养。小梁细胞游离出组织块后，每周换液2次。……