内毒素诱导的葡萄膜炎中虹膜固有组织细胞上MyD88与TLR-4的共表达△

许邦丽 王 婧 齐 欣 杨 硕 卢 弘

急性前葡萄膜炎的发生主要与革兰阴性细菌感染有关，革兰阴性细菌细胞壁的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是固有免疫反应的主要启动因子。Toll样受体-4(Toll-like receptor-4，TLR-4)是革兰阴性细菌细胞壁LPS的模式识别受体，在机体的固有免疫和适应性免疫中起重要作用。在我们的前期研究中发现内毒素诱导的葡萄膜炎(endotoxin-induced uveitis，EIU)中虹膜固有层组织巨噬细胞参与炎症反应，并发现在炎症过程中TLR-4的高表达[1]，提示TLR-4可能在急性前葡萄膜炎的发生、发展中具有一定作用[2]，由此我们推测TLR-4与LPS配体结合启动了炎症过程。本研究利用髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)通过LPS刺激 C3H/HeN(野生型)小鼠和C3H/HeJ(TLR-4基因缺陷型)小鼠，检测TLR-4及MyD88在EIU巨噬细胞上的表达，探讨TLR-4、MyD88依赖信号途径在急性前葡萄膜炎发病机制中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级健康雄性C3H/HeN小鼠25只，6～8周龄，购于北京维通利华实验动物有限公司。雄性C3H/HeJ小鼠5只，6～8周龄，购于南京大学模式动物研究所。C3H/HeN组分为LPS注射后 0 h、12 h、24 h、48 h、72 h 不同时间点，每个时间点5只。

1.1.2 主要试剂与仪器 霍乱弧菌内毒素 LPS(18001株，古典生物型，小川血清型，兰州生物制品研究所)，TLR-4抗体、MyD88抗体、CD163抗体(美国Santa Cruz公司)，FITC标记驴抗大鼠二抗、TRITC标记驴抗山羊二抗、Dylight649标记的驴抗兔二抗(美国Jackson公司)。眼前节照相系统(Topcon眼前节照相系统)，立体视显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜(德国Leica公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型的制作与临床观察 将霍乱弧菌内毒素LPS溶于无菌生理盐水中，配成浓度为2 g·L－1的注射液，每只小鼠腹腔注射0.1 mL，注射后每隔2 h用裂隙灯观察小鼠眼前节，必要时复方托品酰胺散瞳检查，详细记录临床体征并拍照。……