三聚氰胺DNA适体的筛选研究

张 强

三聚氰胺DNA适体的筛选研究

张 强

为了筛选识别三聚氰胺的DNA适体，于体外合成ssDNA文库并固相化于琼脂糖凝胶颗粒表面，将液相中三聚氰胺将与其结合的DNA分子从固相表面分离，进而建立非固相化SELEX技术，最终获得了三聚氰胺识别适体，并采用DNAMAN和RNA Structure软件对适体进行了一、二级结构分析。结果显示，经过10轮筛选，ssDNA文库与三聚氰胺的亲和力呈上升趋势，随机挑选的20个阳性克隆适体根据一级结构的同源性可分为4个家族，二级结构预测以茎环结构为主，表明筛选得到识别三聚氰胺的DNA适体。

三聚氰胺；适体；食品安全；检测技术

小分子污染物问题已经成为世界各国普遍关注的食品安全问题之一，近年来频发的三聚氰胺食品安全事件让人们意识到了此类问题的严重性，更使人们意识到发展针对小分子污染物的新型检测技术的重要性[1]。基于核酸适体(一种新型分子识别元件)的检测技术近年来发展迅速[2-3]。但是，核酸适体检测技术才在食品安全领域刚刚起步，目前还没有关于三聚氰胺核酸适体筛选和应用的报道。本研究旨在采用小分子非固相化SELEX技术，筛选识别三聚氰胺的DNA适体，为三聚氰胺适体检测技术的开发奠定基础。

1 材料与方法

1.1 DNA序列

研究中所使用的DNA序列如表1所示，均由上海英骏生物技术有限公司合成。

表1 研究中使用的DNA序列

注：Library两端是引物结合区，中间用来固定适体库。N10和N20表示ssDNA库的随机区。

1.2 试剂与仪器

Thermo链霉亲和素凝胶：南京生兴公司；……