转化生长因子-β1在多柔比星致大鼠心肌细胞凋亡中的促进作用

陈星，潘建业，周艳芳，王好，顾琳，张国辉

(江苏大学附属人民医院心内科，江苏镇江212002)

蒽环类药物多柔比星(doxorubicin，DOX)作为化疗药物已广泛应用于肿瘤的治疗，但同时也会引起人体严重的并发症，其中以心脏毒性最具代表性，临床上主要表现为心肌病的慢性发展，最终可导致心力衰竭［1］，这一过程被认为是多因素共同作用的结果，主要包括活性氧自由基增多、脂质过氧化、钙超载、细胞凋亡、能量代谢紊乱等［2］。在心衰的发展过程中有多种细胞因子参与调控，转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)作为多效性细胞因子，能够抑制炎症、促进血管新生，但同时也会引起心肌细胞肥大、凋亡及纤维化等［3］。本研究观察不同浓度多柔比星作用于大鼠心肌细胞不同时间后，心肌细胞的存活率和凋亡率的改变以及TGF-β1表达量的差异，探讨 TGF-β1在多柔比星心脏损伤过程中是否具有促进作用。

1 材料和方法

1.1 动物和主要试剂

新生SD大鼠，1～2日龄，雌雄不限，由江苏大学动物实验中心提供。

盐酸多柔比星购自美国Enzo公司，DMEM-F12培养基购自美国Gibco公司，标准小牛血清购自美国Hyclone公司，胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶购自美国Sigma公司，多聚赖氨酸购自碧云天生物科技公司，α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomericactin，α-SA)、链霉素亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，噻唑蓝(MTT)、AnnexinⅤ/PI双染凋亡试剂盒购自南京凯基生物公司，TGF-β1ELISA试剂盒购自R＆D公司。其余生化试剂均为进口分装或国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 原代心肌细胞分离及培养 新生SD大鼠经75%乙醇消毒2次，无菌条件下取出心脏，将其剪成1 mm左右的组织块，用PBS清洗组织块2遍。……