三氧化二砷对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的作用及机制研究

李 丹，崔久嵬，蒿姗姗，牛 超，Aadil Yousif，李 薇

（吉林大学第一医院 肿瘤中心，吉林 长春130021）

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是最为常见的血液系统恶性肿瘤之一，发生率占血液系统恶性肿瘤的10%左右，随着人口的老龄化，该病的发生率在我国呈逐年增高的趋势。三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）在体外对多种实体瘤和血液肿瘤细胞系，包括MM 细胞系均有作用，但其机制尚未完全清楚［1、2］。为了揭示ATO对多发性骨髓瘤细胞系的作用机制，本研究分别对细胞增殖、凋亡、细胞周期、VEGF分泌和Bcl－2［3］表达情况等方面进行探讨。

1 材料与方法

1.1 试剂和仪器

三氧化二砷（sigma公司）、IMDM培养液、胎牛血清（Gibco公司），6孔及96孔板培养板（Coring公司）；CCK－8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒、细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒 （武汉博士德）；ELISA检测试剂盒（R＆D公司）；Bcl－2、β－actin、鼠抗人－抗多克隆抗体（Santa Cruz公司）；兔抗鼠二抗多克隆抗体（中杉金桥）；Western blot试剂盒（KPL公司）；FACScan型流式细胞仪（BD公司）；酶标仪（BIO－TEK公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 RPMI8226细胞株购自ATCC，悬浮培养于IMDM 培养液（内含2mmol／L L－谷氨酰胺、10%的灭活胎牛血清、100U／ml青霉素、100 mg／ml链霉素）中，置于5%CO2饱和湿度的37℃培养箱培养。48h传代1次，取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2 CCK－8法检测ATO作用后细胞生长情况

收集对数生长期的RPMI8226细胞，调整细胞悬液浓度为5×105个／ml，接种于96孔板。每孔100 μl。实验设溶质对照组，细胞不加药组以及细胞加ATO组（ATO 终浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μmol／L）共七组，每组设3个复孔。将各组细胞培养至12h、24h、48h后，每孔加入10μl CCK－8，于5%CO2饱和湿度的37℃培养箱继续培养4h，然后在酶联免疫检测仪450nm处测量各孔的吸光值。取3孔的平均值，计算细胞生长抑制率，绘制细胞生长抑制曲线。……