脐带间充质干细胞的培养及生物学特性

贾芙蓉，何 欣，丁 旭，王 辉，张明明，杨旭红

（1.解放军第二〇八医院，吉林 长春130062；2.吉林省出入境检验检疫局）

间充质干细胞（MSCs）是中胚层发育的早期细胞，为多能干细胞的一种。它最早发现于骨髓中，具有向三种胚层细胞分化的多向分化潜能［1］。近年来，随着细胞生物技术的发展，干细胞移植已经在临床开始应用，间充质干细胞成为人们研究的热点。本实验从脐带分离培养出MSC，并对其形态、免疫表型等基本特性进行研究，为干细胞来源和临床应用奠定基础。

1 材料和方法

1.1 主要试剂和仪器

α－MEM 培养基（Sigma，USA），PBS（北京博奥森生物技术有限公司），T25培养瓶（NEST），0.1%胶原酶I（Sigma，USA），0.25%胰酶（Sigma，USA），地塞米松 0.1μmol／L、β－甘油磷酸钠盐10mmol／L、抗坏血酸磷酸盐50μmol／L T75培养瓶（NEST），150mm 培养皿（NEST），二氧化碳培养箱（上海力申科学仪器有限公司），低温离心机（上海菲恰尔分析仪器有限公司），超净工作台（苏州洁诺净化科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 UC－MSC的原代培养 健康足月胎儿脐带经产妇同意后，根据伦理委员会通过的指导原则采集，将脐带用75%酒精冲洗，然后剔除动脉和静脉，剪碎，成糊状。用0.1%胶原酶I、双抗，37℃消化24小时，再加入0.25%胰酶和盐水，37℃消化1小时，然后加入盐水混匀，离心，沉淀用α－MEM培养液接种于T25培养瓶中，标记为P0。把培养瓶置于37℃，5%CO2培养箱中培养。用倒置显微镜观察细胞的生长情况，4－6天后换液，弃去非贴壁细胞后，每3天换液一次。

1.2.2 UC－MSC的传代和纯化 原代培养的细胞增殖在瓶底融合基本达到90%时，用0.25%胰酶和盐水按1∶1混合，消化细胞，用培养液终止消化反应，再用移液管轻轻吹打，使细胞脱壁，然后放入离心管中，1 300r／min，离心5min，弃去上清，收集细胞，加入新的培养液，混匀后传代。……