IFITM3基因的克隆及其在真核细胞中的表达与定位研究①

朱 娜 李 昌 郭 焱 李 沂 孙丹丹 任静强 杜寿文 秦艳青 王茂鹏 田宇飞 金宁一

(军事医学科学院军事兽医研究所，长春130122)

细胞通过模式识别受体(Pattern recognition receptors，PRRs)识别病原微生物的病原相关分子模式(Pathogen associated molecular patterns，PAMPs)，诱导信号级联反应，激活转录因子，进而激活特定的细胞因子和趋化因子的表达，使机体处于抗感染状态。其中最主要的就是诱导干扰素(Interferon，IFN)，特别是Ⅰ型IFN(IFNα/β)的表达。Ⅰ型IFN通过特异性结合到病毒感染和非感染细胞表面的干扰素受体(Interferon receptor，IFNR)，从而诱导数百个干扰素刺激基因(Interferon stimulated genes，ISGs)的表达，启动或调节机体的免疫应答[1]。在ISGs中，干扰素诱导的跨膜蛋白(Interferon-induced transmembrane proteins，IFITMs)是其中较为重要的一种，其表达后除调节细胞的粘附、影响细胞分化外，还与体内细胞信号转导、肿瘤的形成、生殖细胞的归巢和成熟、骨盐的沉积以及抗病毒反应等活动有关[2]。

IFITM3是近期发现的一种具有广谱抗囊膜病毒活性的蛋白。在人体内，IFITM基因家族含有4个成员，即 IFITM1、IFITM2、IFITM3 和 IFITM5[3]。已经证实IFITM1、IFITM2和IFITM3可以由Ⅰ型或Ⅱ型IFN诱导产生，它们对甲型流感病毒的多个亚型(H1、H3、H5及H7)都有很强的抑制作用，其中IFITM3的抑制效果最强，同时IFITM3还对登革热病毒(Dengue Virus)、西尼罗河病毒(West Nile Virus)、SARS-Co冠状病毒(SARS Coronavirus)、人免疫缺陷病毒(HIV-1)等其他不同类型的病毒均有抑制效果[4-6]。缺失IFITM3后IFN的抗病毒反应会明显变弱，所以IFITM3在干扰素反应中发挥着重要作用，为人体抗病毒免疫所必需[7]。

为此，我们通过人Ⅰ型 IFN(rhIFNα2B)诱导293T细胞，提取细胞总RNA，反转录为cDNA，进行IFITM3的扩增，并将其构建到真核表达载体中，开展其表达与鉴定的研究，该结果为进一步研究IFITM3基因的功能和生物学活性以及作用机制奠定了坚实基础，目前国内尚未见相关研究报道。……