正交试验法研究酸牛奶制石决明的炮制工艺△

陈少丽 王磊磊 张志杰 张艳玲* 朝格图

(1.内蒙古大学化学化工学院，呼和浩特 010021; 2.中国中医科学院中药研究所，北京 100700)

石决明为鲍科动物杂色鲍Haliotis diversicolor Reeve、皱纹盘鲍H.discus hannai Ino、羊鲍H.ovina Gmelin、澳洲鲍H.ruber(Leach)、耳鲍H.asinina Linnaeus或白鲍H.laevigata(Donovan)的贝壳［1］，其性寒，味咸，归肝经，具有平肝潜阳、清肝明目的功能，主要用来治疗头痛眩晕、目赤翳障、视物昏花、清盲雀目等症［2－4］。由于石决明为动物的贝壳，质地坚硬，难于粉碎和煎出有效成分，因此多炮制后使用。2010年版药典收载的为明煅法。然而煅法温度太高，使石决明含有的多种氨基酸及其他少量的有机成分部分或完全损失。因此，需要更好的炮制方法，使之既能易于粉碎和煎出有效成分，又不会使其所含成分有太多损失［5－7］。牛奶炮制石决明是我国民族医在长期医疗实践过程中形成的独特的炮制方法。牛奶不仅含有丰富的营养价值，而且牛奶是一种胶体溶液，具有一定的特殊性。牛奶用于石决明的炮制，可以起到净化药材、便于粉碎、易于吸收、提高临床疗效的作用［8］。然而，牛奶炮制石决明的工艺缺乏科学的规范，而且牛奶炮制石决明的作用机理并不清楚。

牛奶炮制石决明的过程涉及诸多因素，如牛奶用量、煎煮时间、干燥温度和干燥时间等。本论文拟利用正交实验设计方法，以酸牛奶用量、煎煮时间、干燥温度和干燥时间为考察因素，利用原子吸收分光光度法测定Ca2+含量，以石决明酸牛奶各炮制品中总Ca2+含量、水煎液Ca2+含量以及人工胃液Ca2+溶出量为评价指标，对酸牛奶炮制石决明工艺进行优化，以期对酸牛奶炮制石决明的机理进行初步阐释，并为规范蒙药石决明的炮制工艺提供参考依据。

1 实验仪器与材料

1.1 药材:石决明(购于呼和浩特市京远大药房)，挑出杂质，用筛子过滤，选出10～40目的样品，备用。

1.2 仪器:AA7003型原子吸收分光光度计(北京东西电子);DF－101XP集热式测速磁力搅拌器(金坛正基);QE－200克万能粉碎机(浙江屹立);AR224CN电子天平(美国奥豪斯);电热恒温干燥箱(天津华北)。

1.3 试剂:钙单元素溶液标准物质(GBW(E)080118，标准值1000μg/mL，中国计量科学研究院);胃蛋白酶(猪源，规格型号1:3000，瓶装25g，上海晶纯实业有限公司)。

2 试验方法

2.1 炮制工艺考察因素及水平:选择酸牛奶用量、煎煮时间、干燥温度和干燥时间4个因素，每个因素各选3个水平，见表1。

2.2 试验方法

2.2.1 炮制方法:取10～40目石决明样品，称取。根据表1设计的实验条件，分别将石决明和酸牛奶按一定的质量比混合，放入锥形瓶中，在集热式水浴加热，温度为80℃，。随后将样品按一定的温度和时间在烘箱中进行干燥。

表1 酸牛奶制石决明正交实验因素水平设计

2.2.2 石决明生品与制品中总Ca2+含量的测定

2.2.2.1 分别移取 300、400、500、600、700、800μL 的 Ca2+标准溶液，定容至25mL，配置系列浓度Ca2+标准溶液，测定其吸光度值，建立标准曲线，线性回归方程:Y=40.0729X+1.3868，r=0.9994。

2.2.2.2 分别称取石决明各酸牛奶炮制品约1g，置于100mL烧杯里，先加入5mL蒸馏水，再加入10mL稀盐酸，固体表面起泡沫，不断搅拌。待反应完毕后，用漏斗过滤至25mL比色管里，再向烧杯内加入2次5mL蒸馏水洗涤烧杯内剩余固体后，过滤至比色管里，定容至25mL。

2.2.2.3 分别移取上述溶液各 25μl，定容至 25mL。测定各样品的吸光度值，根据上述建立的标准曲线得到各样品中Ca2+的含量(表2)。

表2 酸牛奶炮制石决明正交实验Ca2+含量测定结果

2.2.3 石决明生品与制品水煎液Ca2+含量的测定

2.2.3.1 分别移取 0、100、200、300、400、500μl的 Ca2+标准溶液，定容至25mL，配置系列浓度Ca2+标准溶液，测定其吸光度值，建立标准曲线，线性回归方程:Y=140.7537X－29.0038，r=0.9997。

2.2.3.2分别称取石决明各制品约1g，置于100mL烧杯中，加入20mL蒸馏水，水浴加热40min，适时加入蒸馏水，然后冷却过滤至25mL比色管里。再加入10mL蒸馏水，条件不变，继续加热20min.冷却，过滤，用适量蒸馏水洗涤小烧杯，将比色管内液体定容至25mL。

2.2.3.3 分别移取上述水煎液各10mL，定容至25mL。测定各样品的吸光度值，根据上述建立的标准曲线得到各样品中Ca2+的含量(表2)。

2.2.4 石决明生品与制品人工胃液Ca2+溶出量的测定

2.2.4.1 分别移取 0、50、100、150、200、250μl的 Ca2+标准溶液，定容至25mL，配置系列浓度Ca2+标准溶液，测定其吸光度值，测得线性回归方程:Y=33.0035X –0.2377，r=0.9987。

2.2.4.2 分别称取石决明各制品约 2.5g，用 15mL 人工胃液在36.5℃左右的恒温水浴箱里反应20分钟，过滤至25mL比色管，定容。

2.2.4.3 分别移取100μL液体样品，定容至25mL。测定各样品的吸光度值，根据上述建立的标准曲线得到各样品中Ca2+的含量(表2)。

3 结果与讨论

3.1 石决明酸牛奶制品中总Ca2+含量分析。石决明酸牛奶制品中总Ca2+含量见表2所示。从表2可以直观看出各因素的影响规律是:D＞A＞C＞B，最佳炮制工艺为:A1B3C3D1。可知，在酸牛奶炮制样品与稀盐酸反应的实验中，对实验影响最大的因素依次是干燥时间、酸牛奶用量、干燥温度、煎煮时间。又由A、D组的P ＜0.05(表3)，可知酸牛奶用量和干燥时间对实验结果有显著性影响。

3.2 石决明酸牛奶制品水煎液Ca2+含量分析。石决明酸牛奶制品水煎液Ca2+含量结果如表2所示。从表2可以直观看出各因素的影响规律是:A＞D＞B＞C，最佳炮制工艺为:A3B1C3D2。可知，在水煎液蒸煮实验中，对实验影响最大的因素依次是酸牛奶用量、干燥时间、煎煮时间、干燥温度。又由方差分析表，A、B、C、D 组的P ＞0.05(表3.5)，可知酸牛奶用量、煎煮时间、干燥温度、干燥时间对实验结果没有显著性影响。

3.3 石决明酸牛奶制品人工胃液Ca2+溶出量分析。石决明酸牛奶制品人工胃液Ca2+溶出量如表2所示。从表2可以直观看出各因素的影响规律是:D＞A＞B＞C，最佳炮制工艺为:A1B2C3D3。可知，在酸牛奶炮制样品与人工胃液反应的实验中，对实验影响最大的因素依次是干燥时间、酸牛奶用量、煎煮时间、干燥温度。又由方差分析表，A、B、C、D组的P ＞0.05(表3.7)，可知酸牛奶用量、煎煮时间、干燥温度、干燥时间对实验结果没有显著性影响。

表3 酸牛奶炮制石决明工艺方差分析表

4 结论

本研究利用正交试验法，对酸牛奶炮制石决明的4个因素(牛奶用量、煎煮时间、干燥温度、干燥时间)进行了考察，以石决明酸牛奶制品中总Ca2+含量、水煎液Ca2+含量、人工胃液Ca2+溶出量作为评价指标，利用原子吸收分光光度法对其分别进行了测定。对测定结果分别进行直观分析和方差分析，结果显示，在酸牛奶炮制石决明的工艺条件中，酸牛奶用量A、干燥时间D对结果会产生主要的影响。尤其是石决明样品与稀盐酸的反应中，A、D为显著性因素，相对而言，在整个实验中，煎煮时间B、干燥温度C对测定Ca2+含量的影响比较小。从而，确定酸牛奶炮制石决明的最佳工艺条件为:石决明与酸牛奶用量(g:g)为1:1，煮制6h，于 180℃烘干 1h。

石决明主含碳酸钙，尚含氨基酸等其他多种有机和无机成分。本研究只考察了酸牛奶炮制前后石决明中主成分Ca2+含量的变化。酸牛奶炮制前后石决明的其他有机和无机成分发生了哪些变化，其药理作用和临床效果又有了哪些改变，这些都有待我们进一步探索。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版第一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010，84－85.

［2］肖培根.新编中药志 (第四卷)［M］.北京:化学工业出版社，2002，48－55.

［3］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草 (第25卷)［M］.上海:上海科学技术出版社，1999，36－39.

［4］吴德康，等.石决明成分与结构的分析研究［J］.中草药，2000，31(12):887.

［5］赵泽义，胡 健.浅谈石决明的煅制法［J］.蚌埠医药，1995，13(4):21.

［6］王文凯，彭小平.石决明炮制研究［J］.中成药，2004，26(5):377－379.

［7］李超英，高雅言，杨辛欣，等.石决明炮制工艺研究［J］.中国药房，2008，19(33):2621－2623.

［8］田华咏.中国民族药炮制集成［M］.北京:中医古籍出版社，2000，130－131.