正交试验优选升麻葛根颗粒提取工艺

胡倩，李建华，闫国立（.武警河南总队医院，郑州450052；2.河南中医学院，郑州450008）

升麻葛根颗粒是根据传统古方升麻葛根汤研制而成。升麻葛根汤具有辛凉、解肌、透疹、解毒功能，主要用于治疗麻疹初起未发或发而不透证[1]。现代临床研究表明，该方在治疗带状疱疹后遗症——神经痛方面有满意效果[2，3]。为方便临床用药和控制质量，笔者将升麻葛根汤改剂型为颗粒剂。根据对组方成分的分析，笔者采用正交试验优选升麻葛根颗粒的最佳提取工艺。

1 仪器与试药

LC-10ATVP高效液相色谱（HPLC）仪，包括SPD-10AVP紫外-可见检测器（日本岛津公司）；N2000数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）。

葛根素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：753-200007）；升麻、葛根、芍药、甘草药材均购自河南省顺康医药有限公司，经河南省药品检验所鉴定符合2010年版《中国药典》（一部）有关规定[4]。

2 方法与结果

2.1 因素水平的选择

根据预试验结果，并结合组成药物的化学成分及其性质，确定以水为溶媒，采用正交试验法对升麻、葛根等药材水煎液提取工艺进行优选。以溶媒的用量（A）、提取次数（B）和提取时间（C）为考察因素，每个因素选取3个水平，以葛根素含量和出膏率为评价指标。因素水平见表1。

表1 因素水平Tab 1 Factor and level

2.2 葛根素含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：ODS-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：20 ℃；进样量：20 μL；流速：1.0 mL·min－1；填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-水（25∶75）；检测波长：250 nm。理论板数按葛根素色谱峰计算应不低于4000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的葛根素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.08 mg的溶液，即得。

2.2.3 标准曲线的制备 分别精密量取葛根素对照品溶液1、2、5、7、10 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，测定峰面积。以葛根素检测浓度（X，µg·mL－1）为横坐标，峰面积积分值（Y）纵坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝69693X+170316（r＝0.9999，n＝5）。结果表明，葛根素检测浓度在16～160 µg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.4 样品的制备 取升麻8.33 g、葛根8.33 g、芍药5.00 g、甘草2.50 g，共9份，根据L9（34）正交试验设计表，将不同条件下的水提液分别浓缩至50 mL，水浴蒸干，置于70℃恒温的干燥箱中干燥，即得。

2.2.5 供试品溶液的制备 称取样品0.25 g，置于50 mL容量瓶中，加甲醇-水（25∶75）溶解并稀释至刻度，超声（功率：200 W，频率：25 kHz）处理15 min后依次用滤纸和微孔过滤器滤过，即得。

2.2.6 葛根素含量测定 精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20 μL，分别注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，以外标二点法[5]计算葛根素的含量。

2.3 出膏率的测定

精密移取正交试验下提取浓缩液50 mL，平行移取3份，分别置于已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置于70℃恒温的干燥箱中干燥，迅速精密称定浸膏重量，按下式计算出膏率：出膏率（%）＝浸膏重（g）×浓缩液总量（mL）/取样量（mL）/生药总量（g）×100%。

2.4 正交试验方案与结果

根据各因素水平，选择L9（34）正交试验表进行试验，按“2.2”项下方法测定每次提取后葛根素含量，并计算出膏率。正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

表2 正交试验结果Tab 2 Results of orthogonal test

由表2、表3可知，各因素对提取工艺的影响顺序为提取时间＞提取次数＞加水量。其中，提取时间和提取次数对葛根素含量和出膏率有显著影响（P＜0.05或P＜0.01），最佳水提工艺为A2B1C3，即加入10倍量的水，提取2次，每次2 h。而在正交设计中，未出现此条件下的试验，故按此工艺条件进行补充试验。结果，出膏率为33.46%，葛根素含量为257.9859 mg·g－1，均高于正交试验中的最高值，表明所选工艺可行。

2.5 工艺验证试验

按优选的最佳工艺提取3批样品，测定葛根素含量和出膏率。结果，3批样品中葛根素含量分别为255.8275、259.9758、263.6873 mg·g－1，出膏率分别为33.18%、33.89%、34.53%，均高于正交试验结果，表明此工艺稳定、可行。

3 讨论

升麻葛根颗粒的处方组成及比例与升麻葛根汤相同。本方中葛根为主药，葛根中主要含葛根素，故用HPLC法测定葛根素含量为评价指标，结合出膏率，可评价工艺的合理性。研究发现，按照文献报道方法[6，7]，采用不同比例（30∶70或24∶76）的甲醇-水为流动相，提取结果不甚理想。而采用传统比例的甲醇-水（25∶75）为流动相时，提取物中各成分被有效地分离，且提取物中其他组分对葛根素含量测定无干扰。

[1]陈翠英.升麻葛根汤的临床应用体会[J].肇庆医药，1999，2：32.

[2]张团昌.升麻葛根汤临床应用举隅[J].山西中医学院学报，2003，4（4）：36.

[3]董德翠，王璐瑜.升麻葛根汤加味治疗带状疱疹后遗神经痛26例疗效观察[J].中国民族民间医药杂志，2009，18（5）：103.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：282.

[5]缪 红，王一鸣.正交试验优选养心方煎剂煎煮工艺[J].中国药房，2010，21（19）：1757.

[6]陈礼明，刘 圣，唐丽琴，等.正交试验优选黄连散中葛根等成分的提取工艺[J].中国药房，2006，17（6）：415.

[7]傅应华，姜宁华.眼络通颗粒的提取工艺研究[J].中国药房，2006，17（16）：1212.