盐霉素抑制耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv 增殖并诱导其凋亡*

徐霜清， 祝爱珍， 刘成成， 许婷婷， 陈小宇， 刘革修△

(1 中南大学湘雅医学院检验系，湖南 长沙410013;2 广州金域医学检验中心，广东 广州510330;3暨南大学医学院血液病研究所，广东 广州510632)

尽管酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼可抑制BCRABL 激酶活性，对慢性期慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)治疗有效，但很难达分子学缓解。越来越多的研究表明，白血病复发和耐药的根本原因是白血病干细胞(leukemia stem cells，LSC)的存在［1］。因此，寻找新的、清除LSC 的药物以减少耐药与复发十分必要。最近的研究发现一种名为盐霉素(salinomycin)的抗生素可以直接杀死肿瘤干细胞，其杀死小鼠身上乳腺癌干细胞的效力比普通抗癌药物泰克索(taxol)高100 倍［2－3］。本实验观察盐霉素对耐格列卫的白血病细胞株K562/Glv 细胞增殖的影响，并对其作用机制进行了初步研究，为盐霉素应用于慢性粒细胞白血病治疗探索新的思路。

材 料 和 方 法

1 主要试剂

盐霉素、台盼蓝、Triton X－100、DMSO 和PI 染料购自Sigma。RPMI－1640 培养液和胎牛血清购自Gibco。细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)、caspase－3、caspase－8、caspase－9 和JC－1线粒体膜电位(ΔΨm)检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司。细胞色素C 凋亡检测试剂盒购自Bio-Vision。Fluo－3AM 购自Biotium。Epics XL 型流式细胞仪购自Beckman Coulter。Annexin V－PI 双染测定细胞凋亡试剂盒购自Invitrogen。

2 细胞和细胞培养

格列卫耐药慢粒细胞株K562/Glv 由天津中国医学科学院血液病研究所惠赠。细胞用含10% 胎牛血清、1 ×105U/L 青霉素及100 mg/L 链霉素的RPMI－1640 培养液，置于含5% CO2、饱和湿度、37 ℃孵箱中培养，2 ～3 d 传代。

3 盐霉素对细胞生长的抑制作用

检测盐霉素对K562/Glv 细胞的剂量－效应关系，取对数生长期细胞，调整密度为2 ×108cells/L，100 μL/well，盐霉素设有0.1、0.2、0.4、0.8 和1.6 μmol/L 浓……