内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡＊

孔 曼， 陈 娟， 周 洁， 朱文德， 万丽敏， 熊宇芳， 李子希

1 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系，武汉 430030

2 武汉市中心医院检验科，武汉 430014

3 华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院检验科，武汉 430070

研究表明，心肌细胞凋亡可参与多种心血管疾病的发生过程，如冠心病、心绞痛、心力衰竭、心肌炎及心脏自身免疫性疾病等［1］。Hamada等［2］研究发现大鼠腹主动脉狭窄所致的持续性压力负荷升高可加重内质网未折叠蛋白反应（unfolded protein response，UPR），诱导内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）相关的细胞凋亡，最终导致扩张型心肌病和心力衰竭。在多种致心肌损伤因素的持续作用下，可引起过度ERS，通过CHOP（C／EBP homologous protein）、应激活化蛋白激酶和Caspase－12等内质网凋亡途径相关信号分子引起细胞凋亡［3］。基于上述研究，我们拟通过观察过氧化氢（H2O2）对体外培养的乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用，探讨其可能的信号通路是否与触发ERS调控机制有关。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

细胞株为乳鼠心肌细胞（H9C2），来源于上海细胞典藏中心。DMEM 培养液、胎牛血清由美国Gibco公司提供，伊红和苏木精、碘化丙啶溶液（PI）均购自Sigma 公司。实验中所用抗体购自美国Santa Cruz公司。H2O2购自于北京宏盛苑化工有限公司，为分析纯产品。Annexin Ⅴ－FITC 细胞凋亡检测试剂盒、活性Caspase－12 和活性Caspase－3检测试剂盒购自凯基生物公司。

1.2 实验方法

1.2.1 细胞培养 从液氮罐中取出冻存的H9C2细胞，迅速放入37℃水浴箱中直至融解；放入培养瓶中，加入含10%胎牛血清的DMEM 培养液，放入37℃、5%CO2培养箱中，12h 后换新鲜的培养液；每2～3天传1代，1∶2的比例传代。……