非洲猪瘟病毒VP73结构蛋白表达及鉴定

董 林，王艳萍，张春玲，沈志强＊

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600）

非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）是一种虫媒传播的DNA 病毒，是引起非洲猪瘟的病原［1］，以全身出血、呼吸障碍和神经症状、高死亡率为主要特征［2］。ASFV 基因编码160～170开放阅读框，根据基因序列差异分为22个基因型，其基因组DNA 大小为170 000～190 000nt［3］。ASFV 开放阅读框VP73编码蛋白是其主要结构蛋白，不同毒株间同源性可达97.8%～100%［4］，是保守性最高的编码基因。Pastor等［5］研究发现，ASFV 至少8 个血清型，不同毒株诱导机体产生的VP73抗体的相应抗原性十分保守，且VP73蛋白占整个病毒结构蛋白的32%左右，是ASFV 血清学诊断的良好候选结构蛋白。

ASF流行病学监测显示，世界范围内ASF 流行地域呈现不断扩散趋势，流行毒株基因组变异日趋明显，且软蜱在ASFV 流行和传播中十分重要［6］。但目前国内还未见该病的相关报道，并且跨境传入风险不断增大。因此，建立快速、准确的ASFV 检测方法十分必要。由于国家法律禁止该类活病毒引进，使得利用全病毒进行研究的常规手段受到限制，所以本试验利用人工合成VP73主要抗原表位区，体外构建ASFV 重组抗原表达载体，试图获得ASFV 病毒抗原蛋白的方法，以期为建立快速、安全的诊断和检验ASFV 方法奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 载体和菌株 感受态细胞DH5α、BL21（DM3）表达菌、pGEX－KG表达载体均由本实验室保存。

1.1.2 主要试剂 10×PCR Buffer、dNTP、Taq 酶、DL 2 000DNA Marker、EcoRI和SalI限制性内切酶、T4DNA连接酶、IPTG 诱导剂、低分子量蛋白质Marker均购自大连宝生物工程公司；胰蛋白胨、酵母提取物为OXID公司产品；……