人脐血间充质干细胞治疗急性心肌梗死的研究

李雅娇

辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110021

人脐血间充质干细胞治疗急性心肌梗死的研究

李雅娇

辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110021

目的：研究经冠状动脉内注射人脐血间充质干细胞 （MSCs）治疗急性心肌梗死 （AMI）的疗效。方法：制备脐血间充质干细胞（MSCs）悬液，在AMI患者行PCI术同时经心导管冠脉内注射MSCs悬液，为MSCs实验组。同时设仅行PCI术的AMI患者为PCI对照组。两组在术后7日及90日行心肌核素显像检查及心脏超声心动图检查，分别测定存活心肌和心室功能。结果：MSCs组术后90日左心室射血分数持续改善，与术后7日及PCI对照组间差异显著。MSCs组术后90日SPECT测定的心肌灌注缺损面积显著低于PCI对照组。结论：经冠状动脉脐血间充质干细胞心肌内移植可以显著改善急性心肌梗死患者的心室功能，心肌核素显像存活心肌明显增加。

脐血间充质干细胞；急性心肌梗死；细胞移植

干细胞是具有多项分化潜能的原始细胞，本实验选择人脐血间充质干细胞为种子细胞，经冠状动脉内注射后，在急性心肌梗死患者体内分化为心血管内皮细胞和心肌细胞，有效抑制心室肌病理性重构，减少梗死面积，改善心梗后心脏功能。

1 资料和方法

1.1 实验对象 2010年11月至2012年11月，急性心肌梗死患者在12小时内行急诊PCI治疗，且愿意同时接受脐血间充质干细胞移植治疗的患者39例，为MSCs实验组。同一时间段内，急性心肌梗死患者在12小时内仅行PCI治疗，不接受脐血间充质干细胞移植治疗的患者39例，为PCI对照组。

1.2 实验资料 足月正常分娩的胎盘取自市妇婴医院妇产科 （经产妇同意）。

1.3 方法

1.3.1 脐血间充质干细胞悬液的制备 在无菌条件下，将新鲜胎盘组织小叶用含肝素的PBS反复冲洗，充分去除血液。将胎盘小叶的绒毛膜层组织剪碎，加入含0.1%胶原酶的低糖DMEM，消化30min。200目滤网过滤，过滤后的细胞悬液用PBS洗2次。接种细胞于培养瓶中，加入10%胎牛血清的L－DMEM培养。贴壁48h后，换液去除悬浮细胞。每3～4天换液1次。待细胞80%～90%融合后，用0.05%胰酶消化，按1：2或1：3传代，将传至3代以上的细胞冻存于液氮中备用。移植术前2小时制备脐血间充质干细胞悬液，用无菌生理盐水反复洗刷细胞3～4次，过滤去除细胞团块后以肝素盐水混匀备用，制备干细胞悬液共计6ml。

1.3.2 细胞移植方法 经冠状动脉内注射间脐血间充质干细胞：按照标准PCI的方法将直径适宜的OTW球囊送到梗死相关动脉的闭塞近端，定位的方法以急诊PCI时植入的支架为参考依据，以10atm持续膨胀球囊完全阻断前向血流后经球囊的中央腔注射干细胞悬液，球囊膨的时间为每次2分钟，间隔30秒重新膨胀球囊，直至细胞悬液完全注射完毕。注射的速度以体外预备注射时的压力为依据，使得细胞悬液离开球囊的中央腔后可以迅速沉积到血管壁，调整注射压力使得细胞悬液能够充填整个病变血管段。

1.3.3 存活心肌测定及心室功能测定 术后7日及术后90日，两组所有患者均接受18－FDG－SPECT及超声心动图检查，分别测定存活心肌和心室功能。收缩功能指数为左心室收缩期压力除以收缩末期直径，灌注缺损面积的测定采用bull’s－eye法。采用Sheehan’s方法将运动异常区域垂直分为5个节段分别测定每个节段的长度平均差异。

1.3.4 统计学处理 所有计量资料均以均数±标准差（M±SD）表示，当P＜0.05时为统计学差异存在显著性；计数资料和率检验采用χ2检验。组内研究后的连续性计量资料采用配对t检验，组间非参数比较采用Wilcoxon和Mann－Whitney检验。所有统计学资料在SPSS软件包（version10.1）下自动计算。

2 结果

MSCs组术后90日时超声心动图见心室运动异常（运动减弱，无运动及反常运动）比例显著降低（13±5vs32±11%），同时显著低于PCI对照组术后90日时的测定值（13±5vs28±10%）。MSCs组左心室梗死区域室壁运动速度显著增加（2.17±1.3vs±2.5cm／s），而PCI对照组几无改善（2.19±1.5vs2.7±1.7cm／s）。MSCs组术后90日左心室射血分数持续改善，与术后7日及PCI对照组之间差异显著（67±11%vs49±9%和53±8%），但是术后7日两组之间相比较差异无显著性。MSCs组术后90日SPECT测定的心肌灌注缺损面积显著低于术后7日及PCI对照组。

3 讨论

急性心肌梗死后心室重构及最终出现心力衰竭与坏死心肌范围大小呈正相关，近年来心肌水平再生治疗技术的研究最终使以干细胞心肌内移植的方法成为该治疗技术的核心，并也成为争议最大的领域。但是无论心肌再生治疗技术还存在如何缺陷，可以肯定的是心肌和血管组织再生的概念使以往的治疗急性心肌坏死的方法和思路都发生了根本性的改变。

经冠状动脉内注射干细胞是相对最为简便的方法，从理论上说，MSC是具有贴壁生长和穿透血管壁进入心肌内的特性，因此即使在球囊退缩和恢复前向血流以后，间充质干细胞也不会被血流冲刷到血管的远端去。动物实验也已经发现冠状动脉内的前向血流可以将骨髓单核细胞冲刷到血管的远端，而只能在远端局部区域形成心肌再生，却不能在梗死区域形成心肌再生。

4 结论

MSCs组术后90日时超声心动图见心室运动异常（运动减弱，无运动及反常运动）比例显著降低，同时显著低于PCI对照组术后90日时的测定值。MSCs组左心室梗死区域室壁运动速度显著增加，而PCI对照组几无改善。MSCs组术后90日左心室射血分数持续改善，与术后7日及PCI对照组之间差异显著，但是术后7日两组之间相比较差异无显著性。MSCs组术后90日时SPECT测定的灌注缺损面积显著低于术后7日及PCI对照组，同时左心室舒张末期容积及收缩末期容积也显著降低，左心室收缩末期压力与容积的比值（Psyst／ESV）降低显著。综上所述，经冠状动脉脐血间充质干细胞心肌内移植可以显著改善急性心肌梗死患者的心室功能，心肌核素显像存活心肌明显增加。

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1007－8517（2013）11－0106－02

2013.03.25）